开放细胞生物学与遗传学实验室的实践与体会

实验教学是高校实现素质教育和创新人才培养目标的重要教学环节,开放实验室是为学生提供实践条件的途径之一。分析了实验室开放的必要性,开放的具体做法和体会,以共同探索培养高素质医学创新人才的模式。

Seminar教学法在医学遗传学教学中的探索与实践

Seminar教学法能培养学生自主学习和创新能力,在本科生课程与教学体系的改革中发挥了重要的作用。文章通过在卓越医师班的Seminar教学实践,分析了Seminar教学在促进研究型大学创新人才培养过程中所起到的作用及遇到的问题,提出了探索医学遗传学教学改革的新思路。

开放实验室,深化细胞生物学实验教学改革

实验课是学生综合理解和验证理论的重要途径,实验室的开放是完成教学新目标的有效措施,探讨了在开放性实验室准备工作、具体措施等方面的问题,并提出一系列的改革建议,以期建立可行的开放实验教学体系。

基于翻转课堂的细胞生物学教学改革实践与思考

细胞生物学是生命科学中的前沿学科,是现代高等医学院校重要的基础课程。为提高教学效果,文章阐述了在细胞生物学本科教学中运用翻转课堂教学法的实践过程,结合教学体会,分析了该教学法的优势与不足,并针对学生反馈,提出优化改进的思路,以期与其他同仁共同探讨相关的教学创新方法,提高课程的教学水平。

双氢青蒿素影响人胶质瘤细胞生物学特性的研究

目的观察中药制剂双氢青蒿素(DHA)对胶质瘤SHG44细胞生物学特性的影响。方法利用细胞增殖实验(MTT)法、trans-well法、流式细胞术、聚合酶链反应(PCR)等方法分别检测DHA对SHG44细胞在增殖、迁移、细胞周期及Claudin-1基因表达等方面的影响。结果SHG44细胞的增殖、迁移能力可受到DHA显著抑制;DHA可以显著影响细胞之间的紧密连接蛋白Claudin-1的表达水平,使其上调表达。结论DHA可以通过影响SHG44细胞生物学特性起到抗癌作用,是潜在的治疗胶质瘤的新药。

内质网应激参与低氧诱导的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BmMSCs)在低氧、营养剥夺条件下的凋亡机制。方法分别提取Chop+/+及Chop-/-小鼠骨髓间充质干细胞分离、培养,并用流式细胞术鉴定其表面标记。在低氧、去血清条件下诱导细胞凋亡并用AnnexinⅤ-FITC的检测方法比较两种细胞的凋亡情况。结果用流式细胞术对分离的BmMSCs进行免疫表型分析,结果显示,两种基因型BmMSCs CD44、Scal-1的阳性率至少为75.74%以上,CD34、CD45的表达率皆为2%以下。AnnexinⅤ-FITC凋亡检测显示,缺氧、去血清24 h后,Chop+/+BmMSCs AnnexinⅤ阳性细胞增多,由0 h的16.76%±5.87%增加到29.51%±3.04%(P<0.01);而缺氧、去血清24 h条件下的Chop-/-BmMSCs AnnexinⅤ阳性细胞为11.12%±6.22%,与Chop+/+比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Chop基因缺失可抑制BmMSCs在低氧、去血清条件下的细胞凋亡,表明内质网应激途径参与了低氧、去血清条件下BmMSCs凋亡的发生。

青蒿琥酯通过调控GADD45A、NACC1的表达抑制肝癌细胞的作用

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病理进程中对肿瘤细胞的作用及潜在的机制。方法用含不同浓度ART的培养基处理两种HCC细胞系MHCC-97H、HCC-LM3,以0 mg·L-1 ART处理的细胞作为对照组,对比ART对HCC的作用。采用MTT和克隆形成实验测定ART对HCC细胞生长能力的影响;划痕实验和Transwell实验分别检测ART对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术验证ART对HCC细胞凋亡和细胞周期变化的影响;通过转录组测序分析以及qRT-PCR验证关键基因的表达情况探究ART在HCC细胞中的可能作用机制。结果与对照组相比,ART处理后的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率明显上升,且G_(2)/M期细胞比例明显增高,提示肿瘤细胞被阻滞于该期。使用RNA测序数据进行转录组学分析,确定生长停滞与DNA损伤诱导蛋白45A(growth arrest and DNA damage inducible alpha,GADD45A)是ART的潜在作用靶点,并且提示,ART可通过上调GADD45A的表达进而诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外,生信分析结果提示,GADD45A与其上游转录因子伏隔核相关蛋白1(nucleus accumbens associated 1,NACC1)有蛋白互作现象,并且经ART处理后,GADD45A与NACC1的mRNA水平和蛋白水平均发生明显变化。结论ART可能通过影响GADD45A及其潜在上游NACC1基因的表达抑制HCC的发生发展。通过探究ART作用于HCC的功能影响及发生机制,为临床治疗肝癌提供新药物、新方向和新思路。

c—fos在喉鳞状细胞癌耐药细胞株TU177／VCR中的表达及意义

目的研究原癌基因c—fos在喉鳞状细胞癌细胞TU177多药耐药形成中的作用。方法采用药物浓度梯度递增法建立稳定的喉鳞状细胞癌耐药细胞系TU177／VCR；采用RT—PCR及蛋白质印迹法检测TU177与TU177／VCR中c—fos基因和蛋白表达差异；构建靶向人c—fos基因的敲低和过表达质粒，分别转染TU177／VCR和TU177细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测在TU177／VCR细胞敲低c．fos和在TU177细胞过表达c-fos后对化疗药物的敏感性。组间比较采用t检验。结果TU177／VCR与TU177相比较，对于长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-FU）的耐药倍数分别为26．25、7．33、2．41、5．50，表明TU177／VCR耐药株构建成功；与TU177细胞相比，c-fos在TU177／VCR细胞中表达明显多，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；TU177／VCR细胞敲低c-fos后细胞耐药性降低，TU177／VCR空载组半抑制浓度（IC20）值为（306．2±6．3）μmol／L，敲低组IC50值为（81．3±3．9）μmol／L，敲低组IC50是空载组Ic50的27％（P〈0．05）；在TUl77细胞过表达c-fos后细胞耐药性增加，TU177细胞空载组IC50值为（55．3±9．4）μmol／L，过表达组IC50值为（288．1±7．3）izmol／L，过表达组IC50是空载组IC50的5．21倍（P〈0．05）。结论c—fos对喉鳞状细胞癌TU177／VCR细胞的多药耐药具有重要作用，有可能成为喉癌治疗新的分子靶点。