两种小鼠急性心肌梗死模型制备方法的比较

急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）一直以来都是威胁人们生命健康的严重疾病,近年来,随着人类社会不断趋于人口老龄化,加上快节奏的生活方式,以及来自生活和工作的压力,AMI的发病率越来越高,且病死率也不断升高,给人们的生活带来了极大的威胁（[1]）。对AMI的研究也得到越来越多学者们的关注,在进行研究的过程中使用相应的AMI实验动物模型是实验得以实施的必要条件.

周脂素和ADRP在糖代谢异常大鼠肝脏组织中的表达

目的:探讨脂滴相关蛋白周脂素(perilipin)和脂肪分化相关蛋白(ADRP)在糖尿病发生发展过程中的变化情况以及在糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝中的作用。方法:分别用高脂饲料喂养和高脂饲料喂养加小剂量链脲佐菌素建立糖耐量受损(IGT)和2型糖尿病大鼠模型(T2DM),采用光镜观察各组大鼠肝组织的形态学改变;用ELISA法测定血清周脂素perilipin和ADRP含量;real-time PCR技术检测肝脏组织中perilipin和ADRP mRNA的表达;用Western blotting法检测肝脏组织中ADRP蛋白的表达。结果:HE结果显示,IGT组和T2DM组大鼠均有肝细胞脂肪变性,IGT组变性更严重;各模型组的生化指标与临床相关疾病的表现一致;血清perilipin水平各组之间无差异,但IGT组和T2DM组肝组织perilipin mRNA表达明显升高(P<0.01);与IGT组相比,T2DM组perilipin mRNA表达显著增加(P<0.05)。T2DM组血清ADRP含量较其对照组明显降低(P<0.01);模型组肝组织ADRP mRNA表达明显降低(P<0.01);ADRP蛋白表达较其对照组也明显降低(P<0.01);与IGT组相比,T2DM组ADRP mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论:血清ADRP含量在T2DM的形成中起一定的作用,与胰岛素抵抗指数呈明显负相关;高脂喂养后能导致大鼠糖代谢异常,并伴有非酒精性脂肪肝的发生;糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝的发生可能与肝组织perilipin表达升高和ADRP表达降低有关。

糖代谢异常对大鼠肝脏组织中巨噬细胞移动抑制因子及C-Jun氨基端激酶表达水平的影响

目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化,探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理机制。方法将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型组(n=20)、IGT对照组(n=10)及T2DM对照组(n=10),高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型,高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型,采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达;Western blot方法检测肝脏组织中MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK(p-JNK)的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高(P<0.01),MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高(P<0.05或P<0.01);与IGT组相比,T2DM组caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而JNK磷酸化水平是明显升高(P<0.01)。结论糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝的发生可能与MIF、caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。

糖代谢异常大鼠肝组织中内质网应激相关分子CHOP和Caspase-12的表达变化

目的观察高脂饮食诱导的糖代谢异常大鼠肝脏糖原沉积与内质网应激(ERS)相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)在肝脏中的表达变化。方法 SD雄性大鼠60只,随机分为糖耐量受损组(IGT,n=20),IGT对照组(n=10),2型糖尿病组(T2DM,n=20)及T2DM对照组(n=10)。采用高脂饮食饲养12周诱导IGT大鼠,高脂饮食饲养4周后腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM大鼠。过碘酸雪夫氏(PAS)染色观察各组大鼠肝脏糖原改变;real-time PCR技术检测肝脏组织中CHOP mRNA的表达;Western blot技术检测肝脏组织中Caspase-12蛋白的表达。结果 IGT组和T2DM组大鼠肝脏糖原含量丰富。IGT组和T2DM组肝组织CHOP mRNA的表达水平与各自对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而Caspase-12蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与IGT组相比,T2DM组Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论糖代谢异常大鼠肝组织糖原含量明显增多,ERS相关分子Caspase-12表达水平增高,肝组织中存在内质网应激,肝糖原沉积可能是内质网应激的诱因之一。

氨磷汀与放射性肺损伤中肺剂量体积因素V_(20)的关系

目的建立氨磷汀干预下^(60)Co-γ放射性肺损伤大鼠模型,并探讨氨磷汀在放射性肺损伤剂量体积因素V_(20)=25%和V_(20)=35%条件下发生肺损伤的作用。方法雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组Ⅰ(照射V_(20)=25%)、模型组Ⅱ(照射V_(20)=35%)、药物干预组Ⅰ(氨磷汀+照射V_(20)=25%)、药物干预组Ⅱ(氨磷汀+照射V_(20)=35%)。模型组、药物干预组用^(60)Co-γ射线对大鼠右肺进行照射,于照射后第1,2,4,8和12周末处死大鼠,腹主动脉取血,ELISA法测定血清中转化生长因子β1(TGF-β_1)含量;同时间点取照射后肺组织,HE、Massons染色观察肺组织的病理损伤变化。结果与空白组比较,模型组大鼠肺泡壁增厚,肺泡间质大部分为增生纤维组织和弹力纤维组织,血清TGF-β_1显著升高(P<0.05);与模型组比较,大鼠肺组织在药物干预组(V_(20)分别为25%和35%)出现肺泡壁增厚和纤维化的时间滞后且程度轻,仍见大部分正常肺泡结构,且血清TGF-β_1明显降低(P<0.05);模型组Ⅱ中大鼠肺组织病理损伤和血清TGF-β_1均高于模型组Ⅰ,而其在药物干预组Ⅰ和Ⅱ之间未见显著改变。结论氨磷汀能减轻放射性肺损伤发生的概率,对V_(20)限定值可适当提高。

GDF-15对急性心肌梗死小鼠心脏血管新生及心功能的影响

目的探讨GDF-15对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)小鼠心脏血管新生及心功能的影响。方法64只10周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组:假手术组、模型组、GDF-15 siRNA组和GDF-15 cDNA组,每组16只。GDF-15 siRNA组和GDF-15 cDNA组分别尾静脉注射100μl滴度为106-107的GDF-15 siRNA病毒和GDF-15 cDNA病毒,假手术组和模型组给予同等剂量PBS。注射病毒后第3天各组小鼠在麻醉状态下,于左胸4、5肋间隙暴露心脏,模型组、GDF-15 siRNA组和GDF-15 cDNA组结扎冠状动脉左前降支制作AMI模型,假手术组不结扎左前降支,其余操作同模型组。术后第21天,小动物超声仪检测各组小鼠心功能,然后每组随机取6只小鼠心脏,qPCR及Western blot测定GDF-15表达;另外10只小鼠心脏,甲醛固定,石蜡包埋后,HE染色,瘢痕计算法计算梗死面积;CD34标记进行免疫组化,经IMS图像分析系统处理测定梗死区毛细血管密度;Masson染色,IPP软件进行分析测定梗死区胶原纤维含量。结果①模型组小鼠左心室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、收缩末期前壁厚度(LVAWs)、射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)较假手术组均明显下降,左心室舒张末期内径(LVEDd)和收缩末期内径(LVEDs)则显著增加(均P<0.05)。GDF-15 siRNA组的LVAWd、LVAWs、EF和ES均明显下降,LVEDd和LVEDs与模型组相比均明显增加(均P<0.05);GDF-15 cDNA组的LVAWd、LVAWs、EF和FS均明显高于模型组,LVEDd和LVEDs均明显降低(均P<0.05)。②GDF-15 siRNA组GDF-15的mRNA和蛋白表达分别是模型组的(0.32±0.12)倍和(0.41±0.21)倍(P<0.01),GDF-15 cDNA组是模型组的(3.41±0.23)倍和(4.16±0.19)倍(P<0.01)。③与模型组比较,GDF-15 siRNA组毛细血管密度明显减少,GDF-15 cDNA组明显增多(P<0.01)。④与模型组比较,GDF-15 siRNA组的梗死面积扩大(P<0.05),GDF-15 cDNA组的梗死面积缩小(P<0.01)。⑤模型组胶原纤维含量与假手术组比较代偿性增加(P<0.01);与模型组比较,胶原纤维含量在GDF-15 siRNA组明显增多(P<0.01),在GDF-15 cDNA组被明显抑制(P<0.01)。结论GDF-15能够促进AMI小鼠缺血心脏的血管新生,抑制梗死及胶原纤维沉积,对改善AMI的心功能有非常积极的作用。