人肠道病毒2A蛋白酶生物学作用研究进展

人肠道病毒(HEVs)是近年来危害亚太地区婴幼儿健康的重要病原体。随着HEVs研究的进展,对其2A蛋白在病毒复制、关闭宿主蛋白合成以及逃避机体固有免疫反应等方面的作用有了进一步的认识。本文主要对2A蛋白酶的生物学功能作一综述,对相关病毒致病机制研究以及2A蛋白开发应用有启发作用。

山西吕梁市产ESBL大肠埃希菌基因型和耐药性分析

目的探讨吕梁地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的基因型及其对常用抗菌药物的耐药性,为临床合理用药提供科学依据。方法采用半自动细菌鉴定和药敏分析仪对临床送检的各类标本进行细菌鉴定和药敏试验,按照CLSI推荐的双纸片扩散法和表型确证试验检测产ESBL大肠埃希菌,对产ESBL大肠埃希菌通过PCR法鉴定ESBL基因型。结果临床分离的87株大肠埃希菌中检出产ESBL大肠埃希菌42株(48.3%),PCR结果显示SHV、TEM、CTX基因型分别有1株,4株和10株,27株细菌携带2种以上基因型。药敏结果显示产ESBL大肠埃希菌对青霉素类和头孢菌素类(头孢吡肟除外)的耐药率在95%以上,对环丙沙星、复方新诺明、左氧氟沙星、妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟的耐药率较高(59.52%-92.86%),对头孢西丁和阿米卡星的耐药率较低(<19.05%),对美洛培南和亚胺培南则全部敏感。结论吕梁地区产ESBL大肠埃希菌以多基因型为主,产ESBL大肠埃希菌对16种常用抗菌药物的耐药情况明显高于非产ESBL大肠埃希菌。

EV71-2A突变质粒的构建及体内外功能初探

目的构建pc DNA3.1-EV71-2A的突变质粒(EV71-2Amut),并对其功能进行检测,为进一步研究肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)2A蛋白酶的活性位点及其生物学功能奠定实验基础。方法利用聚合酶链式反应(PCR)定点诱变技术,定点突变编码EV71-2A第21His、39Asp和110Cys氨基酸的位点,构建EV71-2Amut,并测序鉴定。将所构建突变质粒与巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)启动子介导的真核细胞荧光素酶报告基因(pRL-CMV)共转染人横纹肌肉瘤细胞(RD细胞),通过观察转染组的EV71-2Apro和EV71-2Amut对pRL-CMV荧光强度的影响,判断突变质粒的细胞内酶活性。将EV71-2Apro或EV71-2Amut质粒转染BALB/c小鼠股四头肌,用RT-PCR检测局部相应质粒的mRNA水平,并观察局部肌肉组织的病理变化。结果构建的突变质粒EV71-2Amut经测序及比对,结果与预计突变位点一致;在细胞学水平检测到的pRL-CMV荧光强度,EV71-2Amut组比EV71-2Apro组显著增高(P<0.05);小鼠股四头肌注射局部均检出EV71-2Apro和EV71-2Amut的mRNA表达,且与EV71-2Apro组相比,EV71-2Amut注射组的肌肉组织的肌肉凝固性坏死、炎症反应病理损伤较轻。结论成功构建了突变的EV71-2Amut质粒,为研究EV71-2A蛋白酶的生物学功能奠定了实验基础。