氧氟沙星-Fenton体系荧光法测定和评价中草药抗氧化活性

研究利用荧光法测定和评价中草药抗氧化活性。氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)能产生强荧光,在酸性环境中,Fenton反应产生的羟基自由基(·OH)能氧化OFL使其荧光猝灭,加入抗氧化剂或含有抗氧化成分的中草药可清除·OH使与OFL反应的·OH量减少,导致OFL荧光猝灭程度减弱。OFL荧光猝灭程度与加入抗氧化剂量或中草药中抗氧化成分的量呈定量关系,据此建立了一种测定和评价中草药抗氧化活性的新方法。应用该法测定和评价了7种常见中草药抗氧化活性,其中夏枯草、连翘和黄连的抗氧化活性较强。该方法操作简单,体系稳定,可用于中草药抗氧化活性测定和评价。

建立医学检验专业客观结构化临床考试评价体系的思考

现代医学的发展对医学检验专业人才提出了新要求,医学检验专业学生除掌握现有专业知识和技能外,还要具备一定的沟通、分析、判断及综合运用基础、临床学科知识与进展解决临床实际问题等能力。本文针对在医学检验专业中建立客观结构化临床考试(OSCE)评价体系进行了思考,在设置站点、选择内容、制定标准、评价效果、反馈信息及组织管理等方面展开了论述,以期建立科学、可行的OSCE评价体系,为新型医学专业人才培养提供参考。

检验专业课程中融入思政教育的改革探索

课程思政是将科学教育与德育教育协同进行,即将思政教育逐步融入专业课程的日常教学,使二者相互渗透、相互融合,在当今医学教育中人文思政教育日益受到重视,而医学检验技术专业属于医学中一个分支,虽属技术类专业,但在临床疾病的诊断和治疗中有着举足轻重的地位和作用,故在教学中融入思政教育也相当重要。在检验专业课程中要充分挖掘思政元素,提高思政教育认识,教师从教学方法与策略、教学内容、评价体系等方面进行改革探索,通过列举实例、小组讨论、情境感化等方式使得学生对思政与专业的结合更紧密,在专业学习中对思政的认识更加深刻。在精进技术的同时培养良好的行为习惯,树立甘于奉献、严谨治学、敢于创新、实事求是的工作作风和职业修养,成为品质高尚、技术过硬、有创新意识的高素质的医学应用型人才。

基于网络药理学和细胞实验探讨蟾蜍灵治疗胃癌的作用机制

本研究基于网络药理学、分子对接和细胞实验探究蟾蜍灵治疗胃癌的作用机制。利用PubChem和PharmMapper数据库检索蟾蜍灵的药物靶点;GeneCards数据库收集胃癌的相关靶点,运用Venny软件和STRING数据库构建药物与疾病共同靶点的PPI网络图,通过DAVID数据库进行GO富集和KEGG通路分析。利用Cytoscape3.9.0软件进行可视化并筛选核心靶点,通过GIEPA数据库、Kaplan-Meier方法、AutoDock和PyMOL软件分析核心靶点分别与胃癌和蟾蜍灵之间的关系。最后通过细胞实验对网络药理学预测的靶点和信号通路进行实验验证。网络药理学筛选到蟾蜍灵的药物靶点285个,胃癌相关的疾病靶点909个,蟾蜍灵与胃癌的交集靶点91个,结合PPI网络度值排名、胃癌患者中表达水平以及患者生存预后相关性筛选2个核心靶点为HSP90AA1和SRC。KEGG富集分析蟾蜍灵治疗胃癌可能与PI3K-Akt、FoxO、Ras和MAPK信号通路有关。生存分析结果显示,HSP90AA1和SRC mRNA在胃癌组织中表达显著上调,且其高表达的患者总生存期显著低于低表达组。分子对接结果显示,蟾蜍灵与核心靶点具有较好的结合力。细胞实验结果表明,与对照组相比,蟾蜍灵处理胃癌细胞MGC-803后,细胞的增殖、迁移能力均下降,而细胞凋亡数增加。MGC-803细胞中HSP90AA1、SRC、Bcl-2、p-AKT和FoxO1蛋白表达水平显著下调,Bax蛋白的表达显著上调。综上所述,蟾蜍灵可能通过调控HSP90AA1和SRC核心蛋白及Akt/FoxO1信号通路发挥治疗胃癌的作用。

微小RNA-101在急性髓系白血病中的表达情况及临床意义

白血病(leukemia)是一种起源于造血系统的恶性肿瘤,在我国发病率比较高,而且好发于儿童及青少年.白血病有很多类型,其中急性白血病(acute leukemia,AL)细胞发育停滞于较早的阶段,具有发病急、进展快、病死率高的特点.因此,急性白血病是严重危害人类生命健康的重大疾病.目前AL病因及发病机制尚未完全清楚,研究认为AL的发生可能与物理、化学、病毒感染和遗传因素等多因素、多基因,甚至是多分子参与的复杂过程[1].

阿戈美拉汀缓解APP/PS1转基因小鼠焦虑及抑郁样行为的机制

背景:阿戈美拉汀在临床上用于治疗焦虑、抑郁等相关精神行为异常。前期研究证实,阿戈美拉汀能够有效缓解阿尔茨海默病模型小鼠的认知行为、海马突触可塑性及脑病理特征,然而阿戈美拉汀能否改善阿尔茨海默病模型小鼠的焦虑和抑郁样行为仍不清楚。目的:探究阿戈美拉汀对APP/PS1(阿尔茨海默病)转基因小鼠焦虑和抑郁样行为的改善效应及分子机制。方法:①将18只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型对照组(n=9)、模型干预组(n=9),将18只野生型小鼠随机分为对照组(n=9)、干预组(n=9),模型干预组与干预组小鼠腹腔注射阿戈美拉汀10 mg/(kg·d),连续注射31 d后进行高架十字迷宫、强迫游泳行为学实验与海马组织mRNA测序。②取小鼠海马神经元细胞株(HT22)、脑微血管内皮细胞株(bEnd.3),分别分4组培养:空白组不加入任何药物,药物组加入20µmol/L阿戈美拉汀,模型组加入10µmol/Lβ-淀粉样蛋白1-42,实验组加入10µmol/Lβ-淀粉样蛋白1-42+20µmol/L阿戈美拉汀,培养24 h后,免疫印迹检测HT22细胞S416p-tau和S9p-GSK3β的蛋白表达,免疫印迹检测bEnd.3细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白1、糖基化终产物受体的蛋白表达。结果与结论:①在高架十字迷宫实验中,模型对照组小鼠的探索开放臂时间与开放臂进入次数均少于对照组(P<0.05),模型干预组小鼠的探索开放臂时间与开放臂进入次数均多于模型对照组(P<0.05);在强迫游泳测试中,模型对照组小鼠的不动时间长于对照组(P<0.05),模型干预组小鼠的不动时间短于模型对照组(P<0.05);海马组织mRNA测序显示,阿戈美拉汀可以增强APP/PS1小鼠海马区低密度脂蛋白受体相关蛋白1的表达。②免疫印迹检测显示,模型组HT22细胞S416p-tau蛋白表达高于空白组(P<0.05),实验组HT22细胞S416p-tau蛋白表达低于模型组(P<0.05),药物组HT22细胞S9p-GSK3β蛋白表达高于空白组(P<0.05),实验组HT22细胞S9p-GSK3β蛋白表达高于模型组(P<0.05),实验组bEnd.3细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白1蛋白表达高于模型组(P<0.05)。③结果表明,阿戈美拉汀可通过促进脑内β-淀粉样蛋白和tau的清除来缓解阿尔茨海默病小鼠的焦虑和抑郁样行为。

临床基础检验技术教学中渗透人文教育的探索

当前医学检验的迅猛发展,检验的仪器化、自动化使得检验人员人文意识进一步淡化,抱怨、投诉时有发生,医护人员与检验者之间相互信任度不够,故加强检验技术人员的人文教育非常重要。在医学检验专业教学中全程贯穿人文素质教育,通过转变思想认识、学会换位思考、拓宽交流渠道、提升实战能力等方式使专业与人文精神相互融合、相互渗透,以期培养出为临床、为社会服务的具有服务意识、法律意识、竞争意识、创新意识的新型医学检验人才。

瘦素受体3057位基因多态性与2型糖尿病及血脂的关系

目的探讨瘦素受体(leptin receptor,LR)基因第20外显子基因多态性与2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)及血脂的关系。方法采用PCR-RF-SSCP法,检测130名(其中糖尿病患者68例,正常对照62例)山西省吕梁地区汉族人的LR基因第20外显子的基因多态性,分析其与2型糖尿病及血脂之间的关系。结果被检测对象LR第20外显子存在明显的多态性,在所有检测对象中,+3057位核苷酸G→A变异频率为79.27%,其中DM组和正常对照组+3057位基因变异频率比较差异有统计学意义(86.76%vs71.77%,P<0.05)。DM患者中AA型频率显著高于对照组,而GA型频率低于对照组,病例组中GG型频率只有2.94%;AA基因型组的甘油三酯含量高于GA型组,高于GG型组,而高密度脂蛋白低于GA型组,低于GG型组(P<0.05)。结论吕梁地区存在LR第20外显子+3057位核苷酸基因变异,其变异可能通过影响机体脂质代谢等参与2型糖尿病的发生。

临床检验基础实验教学中模拟阳性标本的制作与应用

目的制作模拟阳性标本,满足学生实验教学的需求,达到与临床病理标本检测效果的一致性。方法通过在基础标本中加入所需检测的成分和浓度,根据不同实验现象来定性报告、判断结果。结果模拟标本经过化学定性和显微镜检查,都可观察到阳性指标。结论模拟标本具有成本低廉、生物安全性好、取材方便、制作简单、保存时间长、重现性好、仿真度高的特点,值得推广与应用。

临床生物化学与检验教学研究

临床生物化学与检验是检验医学的主干课程，是一门实践性很强的独立学科，它发展迅速，知识更新快，涉及范浏广。所以，教学不仅要让学生掌握扎实的理论知识，同时还必须熟练地进行实验操作，最重要的是培养学生分析和解决问题的能力。为此，作者就目前临床生物化学与检验理论教学和实验教学过程中存在的问题及建议进行了粗略的分析。

去白细胞时间与不同血型的红细胞免疫功能的关系

目的探讨去白细胞时间对不同血型红细胞免疫功能的影响。方法选取53份标本检测血型，并在采血后1～2h、6～8h、2th去除白细胞，进行红细胞Cab受体（RBC-C3b）花环试验和红细胞免疫复合物（RBC—IC）花环试验。数据采用SPSS19．0软件进行统计学分析处理。结果随着时间的延长，RBC—C3b有减低的趋势，采血后1～2h、6～8h、24h两两比较，差异均具有统计学意义（P〈0．01）；RBCIC却随着时间的延长有增高的趋势，1～2h和6～8h比较，差异无统计学意义（P〉0．05），而1～2h和2／1h、6～8h和24h比较，差异均具有统计学意义（P〈0．01）。但不同血型同一时间去除白细胞，RBC—C3b和RBC—IC分别进行F检验，差异均无统计学意义（P〉O．05）。结论去白细胞时间延长，红细胞免疫功能减低，但血型种类不同，去白细胞时间对其免疫功能的影响没有明显的差异。

薄荷醇对果蝇产卵驱避作用及毒杀效果

【目的】研究薄荷醇对常见几种果蝇Drosophila产卵的驱避作用,并通过后代存活率和发育历期及成虫死亡率以评价薄荷醇毒杀作用。【方法】应用产卵双向选择装置,在0.05%,0.1%和0.2%薄荷醇作用下检测果蝇的产卵选择性;利用双染料食物偏好实验检测薄荷醇对果蝇的摄食行为影响;利用产卵装置,检测薄荷醇对黑腹果蝇D.melanogaster的位置的影响;利用黑暗条件、摘除触角和前腿以及Orco 2突变体测定薄荷醇对黑腹果蝇产卵选择性的影响;并测定薄荷醇对黑腹果蝇后代存活率与发育历期的影响;测定薄荷醇对黑腹果蝇成虫寿命、奔跑速度和攀爬速度的影响;利用二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)荧光染色技术,评估喂食1%薄荷醇3 d后黑腹果蝇成虫肠道内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。【结果】薄荷醇对果蝇雌成虫产卵有驱避性,在0.05%,0.1%和0.2%薄荷醇作用下黑腹果蝇雌成虫的产卵指数分别为-0.42,-0.58和-0.98;铃木氏果蝇D.suzukii、雅库巴果蝇D.yakuba和拟暗果蝇D.pseudoobscura雌成虫对薄荷醇的产卵避性反应与黑腹果蝇雌成虫相同。在摄食过程中,黑腹果蝇及铃木氏果蝇成虫均对薄荷醇培养基产生明显排斥反应。薄荷醇培养基对黑腹果蝇成虫有明显的位置驱避性,0.05%,0.1%和0.2%薄荷醇处理下位置指数分别为-0.32,-0.44和-0.84。各个浓度的薄荷醇对黑暗环境和摘除前足的黑腹果蝇雌成虫仍然表现出显著的产卵驱避性,但在摘除黑腹果蝇成虫触角的条件下,薄荷醇对它们的产卵驱避性显著降低,0.05%,0.1%和0.2%薄荷醇作用下产卵指数分别为-0.04,-0.06和-0.26,薄荷醇对Orco 2突变体仍旧有产卵驱避性。与对照组相比,1%薄荷醇处理组黑腹果蝇成蛹和成虫羽化时间明显延长,分别延长了0.74和0.73 d,存活率明显下降,分别下降了63.2%和91.3%。随着薄荷醇浓度的增加黑腹果蝇成虫存活率呈现下降的趋势,且明显降低其奔跑和攀爬速度,即薄荷醇降低了亲代黑腹果蝇的适合度。1%薄荷醇处理3 d显著提升了黑腹果蝇成虫肠道内的ROS水平。【结论】薄荷醇通过嗅觉介导了果蝇的产卵避性反应,且薄荷醇降低了后代和亲代的适合度和存活率。

1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌定量蛋白质组学分析

目的 基于蛋白质组学,深入揭示1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌21A的分子特征,从而更好地防控食源性疾病的发生。方法 利用定量蛋白质组学技术对肠炎沙门菌株21A进行分析,使用Tims TOF Pro仪器在数据非依赖采集模式下采集质谱数据,利用MSstats软件完成肽段与蛋白的定量以及差异蛋白统计,并对差异表达蛋白的生物学功能进行GO、KOG功能富集、KEGG通路富集分析与CAZY注释、互作分析。结果 菌株21A中共鉴定出3183种蛋白质,其中差异蛋白300种。GO分析表明,差异蛋白主要与催化、结合、细胞内过程和代谢有关;KOG和KEGG分析显示,差异蛋白主要富集在6种代谢通路中;CAZY分析发现,37.96%的蛋白质为糖苷水解酶。结论 本研究揭示了肠炎沙门菌株21A的蛋白质组学特征,该菌株在入侵和感染过程中采用多种生存策略,包括增强毒力因子表达,增加脂质降解和诱导铁获取等。对代谢相关蛋白质的深入分析,有助于深入了解该菌的传播与感染机制,更好地防控食源性疾病的发生。

敲低CCAAT/增强子结合蛋白β促进肝癌细胞的增殖和迁移

近年来已有研究表明,C/EBPβ在肝癌的发生发展中发挥重要的作用,但其具体分子调控机制尚不清楚。本研究通过分析GEO数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库发现,C/EBPβmRNA在肝癌中低表达(P<0.05),且其低表达与肝癌患者预后密切相关。进一步,通过功能富集分析和TIMER数据库分析显示,C/EBPβ主要参与细胞周期、DNA转录等生物学过程,且C/EBPβ表达水平与CD4^(+)T细胞和巨噬细胞的免疫浸润具有较强的相关性(P<0.05)。为了进一步研究C/EBPβ对肝癌细胞增殖和迁移的影响。在肝癌细胞中瞬时转染C/EBPβsiRNA,将其分为si-NC组和siC/EBPβ组。通过qRT-PCR、Western印迹检测肝癌细胞中C/EBPβ在mRNA和蛋白质水平均显著降低(P<0.05);通过MTT检测、平板克隆形成实验和5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的增殖(P<0.05);Transwell和划痕实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的迁移;Western印迹法检测敲低C/EBPβ对肝癌细胞内迁移相关蛋白质(E-cadherin、N-cadherin)以及Wnt/β-catenin信号通路蛋白质表达的影响,结果表明,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞EMT上皮间质转化,并能激活Wnt/β-catenin信号通路的基因表达(P<0.05)。综上所述,C/EBPβ在肝癌组织中低表达且与患者生存预后成正相关。敲低C/EBPβ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通络促进肝癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,为C/EBPβ在肝癌的发生发展中的作用提供了依据,可能是一个肝癌诊治过程中的潜在靶点。

人C/EBP β结构与功能的生物信息学分析及原核表达

目的 研究人CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP β)原核表达载体的构建和蛋白表达,并通过生物信息学分析其结构和生物学功能。方法 收集对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,通过TRIzol法提取SMMC-7721细胞内总RNA,并以RNA为模板采用RT-PCR获得C/EBP β基因的编码序列,通过同源重组的方法将目的基因与原核表达质粒pET-28a(+)相连接,经过大肠杆菌转化、抗性筛选、质粒提取、酶切和DNA测序获得重组质粒pET-28a(+)-C/EBP β。将重组质粒导入大肠杆菌BL21中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogal, IPTG)诱导C/EBP β重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析法纯化C/EBP β融合蛋白,通过蛋白免疫印迹验证目的蛋白并分析C/EBP β的蛋白纯度。同时对人C/EBP β编码的蛋白质进行理化性质、亲水/疏水性、二级结构以及磷酸化位点等生物信息学分析。结果 通过RT-PCR成功获得人C/EBP β基因,构建的pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒经测序鉴定C/EBP β DNA序列完全正确,表明重组pET-28a(+)-C/EBP β质粒构建成功。C/EBP β蛋白是一个性质不稳定的亲水蛋白质,由345个氨基酸组成,分子量为36.105 kD,等电点为8.55。其是一种胞内蛋白质,主要分布在细胞质和细胞核。对其结构分析发现:无规则卷曲是其主要的二级结构,为60.87%。蛋白免疫印迹结果显示通过亲和层析纯化后获得较高纯度的C/EBP β。结论 本实验成功克隆并构建人pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒,获得较高纯度的C/EBP β,为进一步C/EBP β蛋白功能的研究和抗体的制备奠定了良好的基础。

医学检验专业临床输血方向教学与实践探析

随着医疗水平的不断提高，临床用血量也在不断增加，为保障人民群众临床用血安全，我国政府发布了一系列有关血站献血专业执业的政策法规，充分显示了输血医学的重要性。输血医学是一门实用性很强的学科，其内容长期以来缺乏系统性，致使输血医学教育发展的主要路径不清晰，反过来又制约了输血医学的进展。20世纪后半叶，随着医学发展的突飞猛进，输血医学也获得了蓬勃生机。

牡荆素鼠李糖苷通过EGFR抑制酒精引起的胃上皮细胞焦亡

目的探讨牡荆素鼠李糖苷(Vitexin-2″-o-rhamnoside,RHV)对酒精所致胃上皮细胞(human normal gastric epithelial cells,GES-1)焦亡是否有改善作用及其作用机制。方法GES-1细胞分别用不同浓度(0,200,400,600,800,1000 mmol/L)酒精干预,检测细胞存活率、焦亡相关蛋白的表达、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,筛选引起细胞焦亡的最佳干预浓度。GES-1细胞分别用800 mmol/L酒精干预0,2,4,6,8 h,CCK-8检测细胞存活率,筛选最佳干预时间。GES-1细胞分别用不同浓度RHV(5,15,30,60μmol/L)预处理,检测酒精引起的细胞存活率及焦亡相关蛋白的变化,筛选RHV的最佳干预浓度。采用网络药理学分析及分子对接预测RHV的可能作用靶点。GES-1细胞分别用酒精及联合RHV预处理干预,检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)的表达。GES-1细胞分别用不同浓度EGFR抑制剂(0,1,2,4,8,10 nmol/L)及激活剂(0,5,10,20μmol/L)处理,检测p-EGFR蛋白表达,观察核心靶点改变是否影响细胞焦亡。GES-1细胞分别用不同浓度RHV(0,15,30,60μmol/L)预处理,再用EGFR激活剂干预,检测p-EGFR的表达。Western blot和免疫荧光检测焦亡相关蛋白的表达,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH的释放量。结果酒精处理后GES-1细胞存活率呈剂量和时间依赖性降低(P<0.05),LDH释放量及cleaved caspase-1,GSDMD-N,NLRP3,IL-1β蛋白表达剂量依赖性增多(P<0.05),考虑模型的稳定性,后续实验选择800 mmol/L酒精干预4 h。RHV预处理后,酒精诱导的GES-1细胞存活率剂量依赖性升高(P<0.01),NLRP3,COX-2,cleaved caspase-1,IL-18蛋白表达剂量依赖性减少(P<0.05),RHV最佳干预浓度为60μmol/L。酒精性胃炎及牡荆素共同作用的核心靶点可能为IL-6,EGFR,IL-1β等,相关通路集中于氧化还原、代谢、受体活化及EGFR相关通路,且RHV与EGFR可能有较好结合性。与酒精单独处理比较,联合RHV预处理后p-EGFR水平升高(P<0.05)。EGFR抑制剂使酒精诱导的LDH释放量及p-EGFR,GSDMD-N,IL-1β蛋白表达剂量依赖性减少(P<0.05),而EGFR激活剂使p-EGFR和GSDMD-N表达增多(P<0.05)。30,60μmol/L RHV预处理使EGFR激活剂诱导的p-EGFR蛋白水平降低(P<0.05)。结论RHV可通过抑制EGFR磷酸化改善酒精诱导的GES-1细胞焦亡。