枯否细胞在非酒精性脂肪肝炎发生中的作用

目的探讨枯否细胞(Kupffer cell,KCs)在高脂饮食致小鼠非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)发生中的作用。方法选取雌性昆明种小鼠46只,随机分为高脂组与对照组。高脂组给予高脂饮食,12周后每组取小鼠10只,腹主动脉采血后测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素(LPS)水平。取肝组织用于组织病理切片的制备及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测。分离培养 KCs,以探讨发生 NASH 时,KCs 吞噬聚苯乙烯乳珠的能力及其在 LPS 刺激下分泌 TNF-α的变化。同时,采用 Western blot 方法研究肝组织 CD68及 KCs CD14的表达。结果 12周后组织病理学显示高脂组小鼠已发生 NASH,血清 ALT(215.70±15.65)、LPS(0.19±0.04EU/ml)及肝组织匀浆 TNF-α(4.81±0.98ng/ml)水平均明显高与对照组(53.87±6.63,0.08±0.03 EU/ml,3.73±0.67 ng/ml,t=2.87～30.11,P<0.01)。KCs 分离培养结果表明,小鼠发生 NASH时,KCs 呈活化状态,但其吞噬聚苯乙烯乳珠能力降低(高脂组为25.54±8.28,对照组为46.75±10.40,t=5.04,P<0.01),给予 LPS 刺激后 TNF-α的分泌明显增加(高脂组为84.60±14.25,对照组为60.50+8.05,t=4.17,P=0.001)。West-ern blot 结果显示,发生 NASH 时肝组织 CD68及 KCsCD14受体表达上调。结论在高脂饮食所致小鼠发生 NASH 时,虽 KCs 处于活化状态,但其吞噬功能降低而分泌 TNF-α能力则增强。提示 KCs 功能紊乱与 NASH 发生密切相关。

慢性酒精刺激对结肠壁大肠杆菌脂多糖通透的影响

目的探讨慢性酒精刺激对结肠壁粘膜大肠杆菌脂多糖通透的影响.方法 Lieber 氏酒精饮食喂养6周之实验大鼠(n=10),于横结肠肠腔内注入大肠杆菌脂多糖(20μg/ml).注射脂多糖前及注射后5,10,20,30 min 自同一动物分别取门静脉血0.5ml 测定脂多糖含量.取该段结肠固定,应用单克隆抗脂多糖抗体及异硫氰酸荧素标记二抗进行免疫荧光染色,激光共聚焦扫描显微镜下观察抗脂多糖荧光分布.正常大鼠为对照(n=6).结果慢性酒精刺激大鼠结肠腔内注射脂多糖前其门静脉血液中脂多糖含量显著高于正常对照大鼠(3.56±0.67pg/ml vs2.45±0.15 pg/ml,P<0.01),注射脂多糖后不同时间点其门静脉血脂多糖含量均显著高于注射前水平(173.56±23.45 pg/ml,154.78±20.57 pg/ml,43.89±8.67 pg/ml,45.38±7.89 pg/ml vs 3.56±0.67 pg/ml,P<0.01),且其结肠段粘膜层绝大多数细胞胞浆内呈强烈抗脂多糖荧光显色.正常对照大鼠注射脂多糖后门静脉血液中脂多糖含量无明显升高(P>0.05),结肠段粘膜细胞内未见明显抗脂多糖荧光显色.结论慢性酒精刺激可以增加结肠壁粘膜层细胞对肠道细菌脂多糖的通透.

血清对分离枯否细胞细菌脂多糖摄取过程的影响

本文应用单克隆抗细菌脂多糖抗体，利用免疫荧光及激光共聚焦扫描技术，观察了分离培养的枯否细胞在有无血清条件下对二种不同分子结构细菌脂多糖摄取过程的影响。无血清状态下，枯否细胞加入S型脂多糖（S—LPS）及R型脂多糖（Rd—LPS）培育5min后，其胞浆内抗脂多糖荧光强度显著高于空白对照水平，且S—LPS培育后胞浆内荧光强度增高幅度高于Rd—LPS培养后的增高幅度。10％小牛血清状态下，S—LPS培育5min后枯否细胞胞浆出现同等程度的抗脂多糖荧光强度增强，而Rd—LPS培育后枯否细胞胞浆荧光强度无明显改变。枯否细胞胞浆内抗脂多糖荧光着色呈小片状或同点状，胞核内未见明显着色。结果提示，分离培养的枯否细胞能迅速摄取脂多糖入胞浆，摄入胞浆中的脂多糖多以颗粒形式存在，且这一摄取过程受脂多糖分子结构及血液成分的影响。