EAE大鼠民用航空药前后临床评分的比较

目的：探讨在EAE大鼠发病过程中，雷公藤内酯醇及雷公藤内脂醇与地塞米松的联合使用对发病进程、临床评分的影响。方法：将Wistar种健康、雌性大鼠左后肢足垫皮下注射CFA-GPSCH抗原乳剂0.4ml/只，右足背皮下或皮内注射PT0.05ml/只（含5.0×10^9个菌体）。设免疫当日为零天，每天称重，采用双盲法两人进行临床症状评分。结果：免疫后15d，取临床评分相同者的归为一个级别，共获得3个级别的动物，每个级别的动物分成三组分别给予生理盐水、雷公藤内脂醇、雷公藤内脂醇和地塞米松的共同使用。结论，雷公藤组和联合组的发病进程缩短，临床评分明显下降。

法舒地尔通过调节Nrf2/HO-1信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞损伤

背景:越来越多的证据表明,ROCK信号通路参与了炎症过程和氧化应激。法舒地尔是一种有效的Rho激酶抑制剂,课题组前期的系列研究证明法舒地尔具有神经保护作用。然而,法舒地尔是否对星形胶质细胞的氧化损伤具有保护作用及其可能的机制尚不明确。目的:探讨法舒地尔对脂多糖诱导的星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法:将培养的C57BL/6小鼠星形胶质细胞分为PBS对照组、脂多糖模型组(1 mg/L)、脂多糖(1 mg/L)+法舒地尔(15 mg/L)干预组。药物作用24 h后,MTT法检测星形胶质细胞的活性,试剂盒测定星形胶质细胞中丙二醛水平和超氧化物歧化酶活性以评估细胞的氧化应激水平,免疫荧光染色法检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达,免疫荧光染色法检测星形胶质细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的核内转移及血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达,Western blot法检测总Nrf2、核内Nrf2和HO-1的蛋白水平。结果与结论:①与PBS对照组比较,脂多糖组星形胶质细胞活性降低,法舒地尔改善脂多糖诱导的细胞损伤;②与PBS对照组比较,脂多糖导致星形胶质细胞中超氧化物歧化酶活性明显降低,丙二醛水平明显升高(P<0.01);法舒地尔能够显著提高超氧化物歧化酶活性(P<0.01),减少丙二醛水平(P<0.01);③与PBS对照组比较,脂多糖组细胞cleaved-caspase-3表达明显增加;与脂多糖组比较,法舒地尔干预组cleaved-caspase-3表达降低;④法舒地尔可以促进Nrf2A的核内转位,明显增强脂多糖损伤后总Nrf2、核内Nrf2和HO-1的表达;⑤结果表明,法舒地尔能够通过调节Nrf2/HO-1信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞损伤。

雷公藤内脂醇对EAE大鼠MCP-1mRNA表达的影响

目的探讨雷公藤内脂醇(TRD)对EAE大鼠MCP-1mRNA表达的影响。方法将Wistar大鼠免疫后7d随机分成4组:EAE组、TRD1组、TRD2组、TRD3组,给予不同剂量的药物注射,取脑和脊髓制成石蜡切片,进行HE和MCP-1mRNA的原位杂交染色,比较各项临床指标。结果TRD在每只鼠每日40g剂量下影响EAE大鼠MCP-1mRNA的表达。结论雷公藤内脂醇可增加循环中的糖皮质激素从而抑制EAE中MCP-1mRNA的表达,抑制EAE。

雌激素对去卵巢EAE大鼠IFN-γ影响的相关性研究

目的探讨EAE的发病机制和应用雌激素治疗EAE的作用机制,为EAE的免疫病理机制提供新的理论支持,也为今后临床应用雌激素辅助治疗EAE自身免疫性疾病提供实验依据。方法制备去卵巢后的EAE动物模型,随机分组。观察各组在不同时间点的血清E2浓度及血清和脑脊液中白蛋白含量比值,观察体重变化、发病率等临床指标。处死动物,取脑和脊髓用免疫组化技术检测CNS中不同部位干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的表达,并对其进行相关分析。结果IFN-γ主要由进入CNS的淋巴细胞产生,免疫组化染色阳性表达表现为血管渗出的淋巴细胞周围有不同程度着色,且表达程度与病情轻重相一致。结论EAE早期CNS中已有少量IFN-γ表达,活动期表达增加,病情减退表达随之下降。

大鼠脑组织中丙戊酸的HPLC分析

用反相液相色谱 -柱前衍生法分析大鼠脑组织中的丙戊酸。采用脑组织碱化后水提 ,酸化后正己烷萃取的样品净化步骤 ,提高了分析灵敏度并减少了色谱干扰 ,其回收率平均为 80 5 %。脑组织中丙戊酸的线性范围为 0 1～ 2 0 μg/ 2 0 0mg ,最小检测量为 0 0 5 μg/ 2 0 0mg。最大RSD <5 74%。

原花青素B1与B2抑制脂多糖诱导的BV-2细胞炎症反应作用的比较

目的:比较原花青素二聚体的2种同分异构体——原花青素B1和B2对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞炎症反应的抑制作用。方法:体外培养BV-2细胞,MTT法检测原花青素B1与B2对BV-2细胞活力的影响;以1 mg/L的LPS刺激BV-2细胞12 h建立的细胞炎症模型为研究对象,分别采用ELISA法、Transwell趋化实验和Western blot法比较原花青素B1和B2对LPS诱导的BV-2细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、趋化行为及核因子κB(NF-κB)磷酸化的抑制作用。结果:原花青素B1和B2对BV-2细胞没有毒性。与LPS组比较,原花青素B1和B2均可显著降低LPS诱导的TNF-α和IL-1β的释放及BV-2细胞的趋化作用,并抑制NF-κB的磷酸化。结论:原花青素B1和B2均能抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,其作用强度无显著差异。

雌二醇对去卵巢实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠细胞间黏附分子-1及血脑屏障影响的研究

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的发病机制和应用雌二醇治疗EAE的作用机制,为EAE和多发性硬化(MS)的免疫病理机制提供新的理论支持,也为今后临床应用雌激素辅助治疗MS等中枢神经系统(CNS)自身免疫性疾病提供实验依据。方法制备去卵巢后10d的EAE动物模型,随机分组。观察各组大鼠在不同时间的血清雌二醇水平及血清和脑脊液中白蛋白含量比值(QA),通过QA评定血脑屏障(BBB)的损害。评估临床症状,观察大鼠体质量变化、发病率等临床指标。免疫后(post-inoculation,p.i.)6、8、10、12、14、16d处死动物,取脑和脊髓用免疫组化技术检测CNS中不同部位细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,并对EAE组ICAM-1进行相关分析。结果雌二醇治疗组在发病率、体质量变化、症状评分、病灶数、发病时间明显低于EAE组,差异有统计学意义(P<0.05);3组大鼠在p.i.6、8、10、12、14、16dQA值比较,差异有统计学意义(P<0.05);3组大鼠在不同时间QA值达到高峰;3组大鼠在p.i.6dCNS内ICAM-1表达平均灰度比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组大鼠在p.i.8、10、12、14、16dCNS内ICAM-1表达平均灰度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论各组大鼠CNS内均可见ICAM-1的阳性表达,雌二醇治疗组ICAM-1表达明显低于EAE组,雌二醇对EAE的治疗可明显下调ICAM-1表达水平,减少BBB的损害。