山西省布鲁菌病105例临床流行病学调查

布鲁菌病是由布鲁菌引起的重要的动物源性人畜共患急、慢性传染病，属自然疫源性疾病。早在20世纪80年代末，我国布鲁菌病疫情已趋于缓和，但2000年以后疫情再次强势走高。

原发性肝细胞癌患者乙型肝炎病毒X基因突变检测及其临床意义

目的检测原发性肝癌患者和慢性HBV感染者HBVX基因（HBX）位点突变及其临床意义。方法收集2011年7月至2012年9月门诊与住院符合条件的患者共120例：慢性HBV感染组患者76例，原发性肝细胞癌组患者44例，所有患者血清HBVDNA均在检测上限。选用磁珠吸附法提取血清HBVDNA，巢氏PCR扩增HBX基因，测序，使用Chromas及SeqMan软件比对所得HBX基因序列与GeneBank中的HBV标准株序列，检出其突变位点。组间单因素分析采用独立样本t检验，计数资料组间分析采用f检验，率的比较采用石。检验。结果HBX基因区G1440A、G1467C、G／C1479A、C1485T、C1653T突变位点的发生在两组差异无统计学意义，尸值均〉0．05；肝癌组T1674C位点突变率为29．27％，明显高于慢性HBV感染组的6．67％，x^2=10．827，P=0．001，差异有统计学意义。基本核心启动子区T1753C点突变率和A1762T／G1764A双突变率在肝癌组显著高于慢性HBV感染组，尸值均〈0．05，差异均有统计学意义。T1674C、T1753C、A1762T／G1764A位点突变患者的平均年龄均高于相对应的未突变组，分别为（54．81±13．97）岁对比（46．08±14．14）岁；（55．95±7．99）岁对比（45．37±14．79）岁；（53．18±13．40）岁对比（40．96±12．69）岁，t值分别为2．297、3．117和5．035，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。结论HBX基因区T1674C、T1753C及A1762T／G1764A突变在肝癌患者中的发生率高于慢性HBV感染者。T1753C、A1762T／G1764A位点变异可能会抑制HBeAg的水平。

HIV感染者中结核杆菌ESAT-6蛋白特异性T细胞反应的检测

目的检测结核杆菌抗原早期分泌抗原靶分子（ESAT-6）融合蛋白其在人类免疫缺陷病毒感染患者中特异性T细胞反应，从而为艾滋病合并结核杆菌感染的诊断方法的建立提供理论依据。方法利用重组表达结核杆菌ESAT-6蛋白做为抗原，通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测HIV感染者中特异性T细胞反应，并以正常健康者、无HIV感染的结核患者作为对照。结果ESAT-6重组蛋白对结核患者外周血单核细胞ELISPOT方法检测证实其具有良好的抗原性，斑点形成单位数（SFU／10^6PBMC）在结核组和HIV合并结核感染组中显著升高，并与无合并结核感染临床表现的HIV组以及健康对照组间均存在明显的差别。结论重组结核杆菌ESAT-6蛋白可以作为抗原通过ELISPOT方法检测HIV感染者中结核杆菌合并感染。

CpG ODN激活慢性HBV感染者外周血单个核细胞和CD4^＋T细胞功能的研究

目的探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸（ODN）作为佐剂对慢性HBV感染者PBMC和CD4^＋T细胞产生免疫应答的影响。方法将入选慢性HBV感染者20例分成两组，免疫耐受组和免疫清除组各10例，用CpG ODN、HBsAg、M[CpGODN＋HBsAg]分别与同一感染者的PBMC和CD4^＋T细胞孵育，采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测两种细胞IFN-γ的分泌情况，以斑点数的多少来评价细胞分泌IFN-γ的能力。结果CpGODN、HBsAg、M[CpGODN＋HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±8、339±429、375±496；与CD4^＋Tcell孵育后IFN-γ斑点数是1±4、5±16、5±12。在免疫耐受组，CpGODN、HBsAg、M[CpGODN＋HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±8、361±153、375±276；与CD4^＋Tcell孵育后IFN-γ斑点数是0±2、2±2、4±4。在免疫清除组，CpGODN、HBsAg、M[CpGODN＋HBsAg]与PBMC孵育后IFN-γ斑点数是3±21、289±345、405±656；与CD4^＋Tcell孵育后IFN-γ斑点数是2±14、8±40、7±30。PBMC与HBsAg、M孵育后IFN-γ斑点数比较统计分析P：0．720；CD4^＋Tcell与HBsAg、M孵育后IFN-γ斑点数统计分析P=0．890，两种不同细胞中与M孵育后IFN-γ斑点数比较统计分析得P=0．000。结论在免疫耐受组和免疫清除组，CpGODN不显著增加HBsAg刺激PBMC和CD4^＋T细胞分泌IFN-γ，但CpGODN对PBMC刺激效果优于CD4^＋T细胞。

布氏杆菌病的研究进展

布氏杆菌病（Brucellosis,简称布病）,是由布氏杆菌引起的世界范围重要的动物源性人畜共患急、慢性传染病。20世纪50～60年代,我国曾因布病严重流行,进行大规模的动物布氏杆菌（Brucella）感染防治,使发病率显著降低。然而,2000年以来,由于多种原因我国布病疫情出现快速回升,其被报告为发病率上升速度最快的传染病之一。2007年,布病报告发病率上升到全国甲、乙类传染病发病数顺位第10位。

结核分枝杆菌抗原ESAT-6和CFP-10及rCFP10-ESAT6融合基因在大肠埃希菌中的表达及比较

目的构建结核早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)、培养滤液蛋白10(CFP-10)及重组CFP10-ESAT6(rCFP10-ESAT6)融合蛋白的原核表达载体,获得纯化蛋白并比较三者表达特点。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增ESAT-6、CFP-10基因片段,融合PCR技术扩增rCFP10-ESAT6片段,分别连接到pGEM-T载体,测序正确后插入原核表达载体pET-32a(+)或pET-28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化3种蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot分析验证目的蛋白的抗原特异性。结果pET-32a(+)-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达,分子量为31kD,目的蛋白约占菌体总蛋白的42%;pET-32a(+)-CFP10、pET-28a(+)-CFP10-ESAT6重组蛋白以可溶性形式表达,分子量分别为33kD和28kD,目的蛋白分别占菌体总蛋白的73%和48%;Western blot证实其均具有良好的抗原性。亲和层析法获得了纯度较高的重组蛋白。结论利用大肠埃希菌BL21(DE3)成功表达了具有良好抗原性的ESAT-6、CFP-10融合蛋白及rCFP10-ESAT6重组蛋白,为深入研究其免疫原性和生物学特性奠定了基础。