雷公藤多甙对银屑病患者T淋巴细胞亚群的作用及意义

目的 为了进一步了解银屑病发病与T淋巴细胞亚群的关系 ,探讨雷公藤多甙治疗进行期寻常型银屑病可能的发病机制。方法 将 30例进行期寻常型银屑病患者用雷公藤多甙治疗 ,同时取 30例相应条件的正常人作为对照组。采用流式细胞仪进行检测 ,观察患者组治疗前后与正常对照组外周血T淋巴细胞亚群的变化情况。结果 进行期银屑病患者治疗前外周血CD4+ 、CD4+ /CD8+ 、CD3+ 均较正常对照组显著降低 ,而CD8+ 升高 ,在治疗后CD3+ 、CD4+ 、CD4+ /CD8+ 较为正常。而CD8+ 无明显变化。结论 T淋巴细胞亚群CD4+ 、CD8+ 在银屑病发病中具有重要作用。雷公藤多甙是治疗进行期银屑病的一个有效药物 。

两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株

目的通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株。方法通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证。结果通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子。经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子。结论在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广。

咪喹莫特对尖锐湿疣患者外周血中Th_1/Th_2细胞因子水平的影响

目的探讨咪喹莫特对尖锐湿疣患者外周血Th1/Th2细胞因子的影响。方法观察5%咪喹莫特乳膏治疗前后尖锐湿疣患者外周血中IL-2、IFN-γ、IL-4的表达水平及比值的变化,用流式细胞仪检测20例尖锐湿疣患者组5%咪喹莫特乳膏治疗前后和20例正常对照组外周血CD4+T细胞IL-2、IFN-γ、IL-4的含量。结果尖锐湿疣患者组治疗前IL-2、IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.05),而IL-4表达高于正常对照组(P<0.05);尖锐湿疣患者组治疗后IL-2、IFN-γ表达高于治疗前,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);尖锐湿疣患者组治疗后IL-4表达低于治疗前与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论5%咪喹莫特通过增强机体细胞免疫应答而上调尖锐湿疣患者外周血Th1/Th2细胞因子的比值,发挥对尖锐湿疣患者机体的免疫调节作用。

联合用药治疗掌跖脓疱病的疗效分析

探讨雷公藤多甙、四环素、氨苯砜联合治疗掌跖脓疱病的疗效、复发性和安全性分析。采用随机的方式将６３例病例分为Ａ、Ｂ两组。结论：联合用药治疗掌跖脓疱病疗效好，复发率低，较为安全，其不良反应能够耐受。

免疫磁珠法分选骨髓CD34^+细胞:纯度影响因素的分析

背景:免疫磁珠分选技术已成为分选CD34+细胞的主要方法之一,在长期实验中发现诸多因素影响其分离纯度,包括磁珠与细胞孵育时干冰与碎冰的使用、磁珠与细胞孵育及分离时摇床的摇摆方向、红细胞裂解液裂解单个核细胞的使用等。目的:在免疫磁珠分选CD34+细胞过程中分别对上述影响因素进行分析改进,以提高分选CD34+细胞的纯度。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2008-07/2009-03在太原市中心医院皮肤科实验室完成。材料:骨髓象筛选正常的人骨髓29份,由太原市中心医院血液科提供,取材均经患者同意。CD34+免疫磁珠为Dynal公司产品。方法:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离培养人骨髓单个核细胞,用免疫磁珠法分选骨髓CD34+细胞,对其分选过程中的主要环节如冰块与碎冰、摇床的种类以及红细胞裂解液的使用进行方法改进。方法1:按试剂盒提供方法进行磁珠常规分选CD34+细胞。方法2:在方法1基础上,用碎冰替代冰块进行磁珠与单个核细胞孵育。方法3:在方法2基础上,用万向摇床替代水平摇床。方法4:在方法3基础上,向单个核细胞中预先加入红细胞裂解液裂解残留红细胞。主要观察指标:通过流式细胞仪检测不同方法分选出的CD34+细胞纯度。结果:随着不同环节的逐渐改进,CD34+细胞纯度由(32.7±6.6)%升至(84.5±5.2)%,方法1,2,3,4所分选出的CD34+细胞纯度逐渐升高,组间方差分析差异显著(F=76.209,P<0.01),Bonferroni法两两比较差异亦有非常显著性意义(P<0.01)。结论:碎冰、万向摇床及红细胞裂解液的使用能有效提高免疫磁珠法分选人骨髓CD34+细胞的纯度。

不同状态下SAP2和STP1在白念珠菌伊曲康唑耐药中的作用

目的探讨游离状态和生物膜状态下,毒力因子SAP2、转录因子STP1在临床分离白念珠菌伊曲康唑(ITR)耐药中的作用及其相互关系。方法实验菌株为临床分离伊曲康唑耐药白念珠菌菌株和敏感菌株各10株。首先,采用PCR方法对游离状态下临床分离白念珠菌伊曲康唑耐药和敏感菌株的SAP2、STP1进行测序,分析基因突变与耐药的关系;之后,利用96孔板构建白念珠菌生物膜;采用RT-PCR方法检测游离状态和生物膜状态下白念珠菌SAP2、STP1、STP1Δ/Δ的mRNA表达水平,比较分析不同状态下SAP2、STP1、STP1Δ/Δ的表达是否具有差异和相关性;进一步通过结晶紫染色法和激光共聚焦显微镜观察白念珠菌生物膜在各时间点的生长形态以及SAP2、STP1、STP1Δ/Δ对其形成能力的影响。结果SAP2测序显示无错义突变,存在3个同义突变(T276A、G543A和A675C);STP1基因测序发现两个错义突变N394S和D71I,以及2个同义突变C453T、A799G,其中N394S在全部耐药和敏感菌株中都存在,而D71I仅存在于两株敏感菌株中。与敏感菌株相比,白念珠菌耐药菌株和STP1基因缺陷菌株(STP1Δ/Δ)的生物膜形成能力更强;耐药菌株在游离状态和生物膜状态下SAP2和STP1的表达均上调(P<0.05),并且与游离状态相比,耐药菌株和敏感菌株在生物膜状态下二者的表达量均显著升高(P<0.05)。而无论在何种状态下,SAP2和STP1的mRNA表达水平均呈显著正相关。此外,与标准菌株ATCC11006相比,STP1基因缺陷菌株(STP1Δ/Δ)中的SAP2表达在两种状态下也显著上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论生物膜的形成可以使白念珠菌伊曲康唑耐药性增加,但SAP2、STP1基因突变可能与其耐药性无关;游离状态下,SAP2的高表达与白念珠菌ITR的耐药性有关,而无论在游离状态还是生物膜状态下,白念珠菌对ITR的耐药性增加均与STP1有关。此外,STP1对SAP2是具有调控作用的,其机制亟待研究。