ERK1／2MAPK通路在甲羟戊酸促进人类肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的探讨甲羟戊酸（MVA）促进人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖中，细胞外信号调控蛋白激酶1／2（ERK1／2）丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路的作用及机制。方法将体外培养的HMC根据不同的处理因素分为正常对照组、MVA组（100nmol／L）、MVA（100nmol／L）加PD98059（50μmol／L）组即MVA加PD组，以不含干预因素正常培养细胞为对照组，分别于干预后12、24h收集各组细胞，应用Western blot法检测P-ERK1／2、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①p-ERK1／2蛋白的表达：MVA组在各个时间点的表达均明显上调，且随时间延长，蛋白表达增加（P〈0．05）；而MVA加PD组在各个时间点的表达均无明显变化（P〉0．05）。②Bcl-2与Bax蛋白的表达：MVA组与MVA加PD组在各个时间点Bcl-2蛋白表达均明显上调，且随时间延长表达增加（P〈0．05）；而各个时间点Bax蛋白的表达均明显下调（P〈0．05）；但随时间延长，MVA组表达下降（P〈0．05），而MVA加PD组表达下降不明显（P〉0．05）；③Bcl-2／Bax：MVA组与MVA加PD组在各个时间点均升高，且随时间延长Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）；而在各个时间点，MVA加PD组较MVA组Bcl-2／Bax明显下降（P〈0．05）。结论MVA可通过Ⅱ水1／2信号转导通路促进HMC增殖；ERK1／2信号转导通路促进HMC增殖可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达，并最终通过上调Bcl-2／Bax而实现。

实验性铅性肾病大鼠血清γ-干扰素的水平

目的通过观察实验性铅性肾病大鼠肾脏纤维连接蛋白(FN)的表达及血清中γ-干扰素(IFN-γ)的水平,探讨铅性肾病肾脏纤维化的发病机制。方法SD大鼠48只适应性饲养1周,随机分为6组,每组8只,A、B、C组为染铅组,分别给予质量分数为0.5%的醋酸铅喂饮1、2、3个月;Ac、Bc、Cc组为相应正常对照组,分别给予蒸馏水喂饮1、2、3个月。实验结束时称。肾重、体重变化,原子吸收光谱石墨炉法测定血铅、肾铅含量,电子显微镜观察肾脏的超微病理改变,免疫组化和RT-PCR方法检测。肾组织中FN蛋白及其mRNA的表达,ELISA方法检测血清中IFN-γ含量。结果染铅3个月时大鼠体重明显低于对照组,肾重明显高于对照组,肾脏在电镜下出现超微病理改变;染铅2个月后,肾组织中FN蛋白及其mRNA的表达明显增高;3个染铅组与相应对照组比较,血铅、肾铅含量明显增高;血清中IFN-γ的含量则明显降低。结论染铅2个月后肾组织即启动了纤维化的早期环节,铅导致的肾脏纤维化与IFN-γ的降低有关。

NLRP3炎症复合体在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究NLRP3炎症复合体在高糖培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法将NRK-52E细胞分为正常组、等高对照组、高糖组、高糖+阴性对照组及高糖+干扰组。培养48h后应用Western blot检测各组NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及天冬氨酸蛋白水解酶1、3(Caspase-1、3)的表达情况。细胞凋亡情况采用流式细胞仪检测。结果高糖刺激可上调NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体的表达及Caspase-3的表达(P均<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);通过特异性的SiRNA抑制NLRP3蛋白质的表达后,细胞NLRP3炎症复合体及Caspase-3的表达均减少,细胞凋亡率下降(P均<0.05)。结论高糖促进NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体表达,针对NLRP3的SiRNA通过减少NLRP3炎症复合体的表达从而抑制高糖诱导的细胞凋亡。

NALP3-siRNA对缺氧复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的通过构建NALP3-siRNA，观察其抑制大鼠。肾小管上皮细胞（NRK-52E）NALP3表达的作用，探讨其对细胞缺氧复氧（HR）损伤的保护作用。方法（1）利用三气培养箱调整氮气压力条件形成缺氧条件，缺氧1h，按复氧时间设复氧后1、2、4、8、16、24h组，分别检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）含量以及细胞NALP3蛋白的表达。（2）NRK-52E转染NALP3-siRNA质粒，Western印迹法检测转染细胞NALP3蛋白的表达。（3）将细胞分为正常对照组、HR组、无关siRNA转染组和NALP3-siRNA转染组。分别于缺氧1h、复氧4h检测培养液上清LDH的含量和细胞NALP3蛋白的表达。（4）采用Annexin V／PI染色结合流式细胞仪、Western印迹法、电泳迁移率实验（EMSA）分别检测细胞凋亡率、细胞IκB-α、Bax和Bel-2蛋白的表达以及NF-κBDNA结合活性。结果（1）与对照组相比，NRK-52E缺氧复氧后活细胞计数和细胞存活率显著下降（P〈0．05），细胞NALP3表达增加，在复氧4h达到高峰。（2）与无关siRNA转染组相比，NALP3-siRNA转染组NALP3蛋白表达水平显著下调（P〈0．05）。（3）缺氧复氧后，与无关siRNA转染组相比，NRK-52E细胞NALP3蛋白表达显著下降（P〈0．05）。（4）与对照组比较，HR后细胞IκB-d磷酸化和降解以及NF-κBDNA结合活性增加，细胞NALP3、Bcl-2和Bax蛋白的表达明显上调，而NALP3-siRNA转染组细胞IκB-α蛋白的降解，NF-κBDNA结合活性以及Bax／Bcl-2蛋白的比值均低于无关siRNA转染组（均P〈0．05）。同时，各组细胞凋亡率也明显增多，其中NALP3-siRNA转染组细胞凋亡率明显低于无关siRNA转染组（均P〈0．05）。结论NALP3-siRNA能够显著抑制肾小管上皮细胞内NALP3的表达，对肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NALP3表达，对NF-κB的活化以及Bcl-2和Bax蛋白表达的不同调控，减少细胞的凋亡。