大鼠膝关节负重与非负重区软骨组织学对比分析

目的观察大鼠膝关节软骨负重区与非负重区组织形态、基质中蛋白多糖成分和Ⅱ型胶原分布差异。方法 3月龄SD(Sprague-Dawley)大鼠8只,切取双膝关节,沿矢状面整体切片,采用HE染色、p H值1.0和2.5阿尔新蓝染色、番红O染色、阿尔新蓝-番红O复染观察软骨形态结构和基质蛋白多糖成分,并测量软骨厚度,免疫组化检测Ⅱ型胶原分布。分别观察负重区与非负重区软骨形态和基质染色差异,并利用图像分析系统,对基质成分染色深浅进行光密度定量,采用独立样本t检验进行统计分析。结果负重区与非负重区软骨厚度、细胞分布、形态结构均有较大差异。负重区软骨较非负重区明显增厚[胫骨平台(265±39)μm vs.(179±27)μm,t=5.128,P=0.000 2;股骨髁(219±33)μm vs.(132±21)μm,t=6.291,P<0.000 1],且软骨各层结构特征较非负重区更加明显。阿尔新蓝染色结果显示,负重区的非钙化层比非负重区染色更浅(胫骨平台0.073±0.013vs.0.354±0.034,t=21.83,P<0.000 1;股骨髁0.058±0.020 vs.0.131±0.022,t=6.945,P<0.000 1),而番红O深染(胫骨平台0.246±0.013 vs.0.158±0.034,t=6.838,P<0.000 1;股骨髁0.171±0.020vs.0.086±0.022,t=8.086,P<0.001),差异均有统计学意义,但上述两个区域钙化层的阿尔新蓝染色和番红O染色结果并无统计学差异。阿尔新蓝-番红O复合染色结果显示,负重区软骨的阿尔新蓝染色面积百分比明显少于非负重区[胫骨平台(19.3±5.1)%vs.(88.2±4.2)%,t=29.50,P<0.000 1;股骨髁(36.2±5.8)%vs.(69.5±7.1)%,t=10.27,P<0.000 1],而番红O染色面积百分比却大于非负重区[胫骨平台(72.6±8.2)%vs.(31.2±5.2)%,t=12.06,P<0.000 1;股骨髁(72.1±7.6)%vs.(26.1±8.1)%,t=11.71,P<0.000 1],差异均有统计学意义。负重区软骨非钙化层p H 2.5阿尔新蓝染色明显较p H 1.0阿尔新蓝染色加深。免疫组化未发现负重区与非负重区Ⅱ型胶原平均光密度存在统计学差异(胫骨平台0.033±0.005 vs.0.029±0.006,t=1.449,P=0.169 5;股骨髁0.031±0.009 vs.0.027±0.002,t=1.227,P=0.240 0)。结论胫骨和股骨髁负重区较非负重区厚度增加,软骨各层结构特征更加明显。负重区与非负重区比较,基质中糖胺多糖的含量明显增加,软骨透明质酸含量明显减少,硫酸软骨素和硫酸角质素含量明显增加,而Ⅱ型胶原含量并无差异。说明不同的受力环境可以造成软骨形态结构和基质成分差异,负重区软骨的形态结构更加适应于承受关节的力学作用。同时提示临床用来修复负重区软骨缺损的非负重区软骨缺乏适应负重区力学环境的组织结构,可能是骨软骨移植手术后移植物退化的重要因素。

癌相关成纤维细胞来源的外泌体在促骨肉瘤侵袭转移中作用的实验研究

目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体对骨肉瘤侵袭及转移的影响。方法利用人源骨肉瘤细胞株Saos-2采用差速贴壁法分离、培养CAFs,显微镜下观察CAFs的形态,免疫组织化学观察α-SMA蛋白表达对CAFs进行鉴定。培养CAFs,采用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒分离外泌体。通过透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体特异性标记蛋白β-actin、CD63表达情况对外泌体进行鉴定。培养人源骨肉瘤细胞株Saos-2,分为外泌体组和对照组,采用细胞划痕及Transwell小室实验观察外泌体对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响。选取一级5周龄BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按编号随机分为外泌体组和对照组,每组6只。两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右侧背部皮下接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,建立裸鼠骨肉瘤肿瘤模型。造模结束后即刻进行尾静脉注射:外泌体组每只裸鼠通过尾静脉注射浓度为0.1μg/μL的外泌体悬液30μL,对照组裸鼠尾静脉注射等量生理盐水,两组均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日观察裸鼠成瘤情况,从裸鼠右侧背部皮下可触及肿块开始,测量两组裸鼠肿块的最长径和最长径的最大垂直短径,计算肿瘤体积,此后每周测量1次,共测量6次。完成最后一次测量后腹腔麻醉断椎法处死裸鼠,完整取出肿块并称重。取裸鼠肺组织进行切片HE染色观察两组裸鼠肺转移情况。结果显微镜下观察CAFs呈长梭形,排列杂乱,无方向性;细胞免疫组织化学染色结果显示:CAFs的α-SMA蛋白表达阳性,提示CAFs提取成功。电镜观察外泌体呈70~100 nm圆形或椭圆形膜性囊泡状结构;Western blot结果显示外泌体中CD63蛋白呈高表达,β-actin蛋白表达较弱,提示成功分离CAFs来源外泌体。细胞划痕实验、侵袭实验结果显示:外泌体组细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数目分别为(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%、(53.67±5.69)个,均高于对照组的(0.81±0.11)mm、0.32%±0.11%、(31.67±8.08)个,差异均有统计学意义(t=6.209、6.209、3.856,P值均<0.01)。外泌体组和对照组12只裸鼠采用皮下移植成瘤法接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,均造模成功,实验过程中无一例动物死亡。两组裸鼠均于第1次注射肿瘤细胞后1周触及肿块,肿瘤体积均随着时间的延长明显增大,差异均有统计学意义(F=49.428、8.477,P值均<0.05)。两组间比较,第1、2次测量肿瘤体积,差异均无统计学意义(P值均>0.05);而第3~6次测量肿瘤体积,外泌体组均大于对照组,差异均有统计学意义(t=4.697、4.825、3.516、2.706,P值均<0.05)。测量6次后处死裸鼠,剥除肿瘤,外泌体组肿瘤质量(1.62±0.29)g大于对照组(1.00±0.43)g,差异有统计学意义(t=2.929,P<0.05)。肺组织切片HE染色结果显示,两组裸鼠均发生肺转移,外泌体组肺组织转移灶数量为6.63(3,17)个,多于对照组的1.17(0,3)个,差异有统计学意义(W=36.000,P<0.01)。结论CAFs来源的外泌体可增加骨肉瘤细胞株Saos-2的迁移及侵袭能力,同时促进骨肉瘤的生长和肺转移的形成。

微创经皮接骨板与切开复位钢板内固定治疗肱骨干骨折疗效的Meta分析

目的通过Meta分析比较微创经皮接骨板(MIPO)与切开复位钢板内固定(ORIF)治疗肱骨干骨折临床疗效的差异。方法计算机检索PubMed数据库、Cochrane数据库、中国知网数据库、万方数据库,辅以手工检索、文献追溯相关文献,收集2010年1月至2018年6月国内外已发表关于MIPO与ORIF治疗肱骨干骨折对照研究中、英文文献,严格评价质量及提取相关数据,运用REVMAN5.3软件统计分析两组患者在美国加州大学肩关节功能评分系统(UCLA)评分、Mayo肘关节功能评分标准评分(MEPS)、骨折愈合时间、骨折不愈合率和并发症发生率等方面的差异。结果本研究共纳入9项研究,共452例肱骨干骨折患者,其中MIPO组216例,ORIF组236例。Meta分析结果显示:MIPO组患者在UCLA肩关节功能评分(WMD=0.36,P=0.03)较ORIF组更高,并发症发生率(OR=-0.15,P<0.05)及医源性桡神经损伤发生率(OR=0.24,P<0.05)较ORIF组低,骨折愈合时间(SMD=-0.36,P=0.02)较ORIF短。而MIPO组和ORIF组患者在MEPS评分(WMD=-0.48,P=0.43)、骨折不愈合率(OR=0.45,P=0.11)方面差异无统计学意义。结论对于肱骨干骨折,MIPO是一种很好的手术方式,在术后肩关节功能、骨折愈合时间、并发症发生率和医源性桡神经损伤率方面均优于ORIF。

膝关节周围镇痛辅以糖皮质激素对全膝关节置换术后疗效评价的Meta分析

目的用Meta分析的方法研究膝关节周围注射混合镇痛是否辅以糖皮质激素对全膝关节置换(TKA)术后疼痛缓解及功能恢复的疗效分析。方法分别在PUBMED、Springer Link等国内外期刊中检索TKA术中关节周围混合镇痛药物辅以与未辅以糖皮质激素注射的病例对照相关文献,严格按照满足随机对照试验、干预措施等纳入标准和不符合纳入条件的排除标准对文献进行筛选并提取相关资料,通过Review Manager 5.0软件对资料进行Meta分析。结果最终共纳入随机对照试验7篇。资料分析显示,膝关节周围注射混合镇痛药辅以糖皮质激素对TKA后前2 d及1周膝前痛视觉模拟评分(VAS评分)可降低[MD=-0.92,95%CI(-1.70,-0.14),P=0.02;MD=-0.48,95%CI(-0.73,-0.22),P<0.001;MD=-0.31,95%CI(-0.56,-0.05),P=0.02];直腿抬高试验平均所需时间可缩短[MD=-0.65,95%CI(-0.83,-0.47),P<0.001]、平均住院日有缩短[MD=-1.34,95%CI(-1.74,-0.95),P<0.001]、降低TKA后吗啡前2 d使用量[MD=-0.70,95%CI(-0.83,-0.57),P<0.001;MD=-0.53,95%CI(-0.87,-0.18),P=0.003]。结论膝关节周围注射混合镇痛药辅以糖皮质激素可以缓解术后早期TKA膝关节疼痛,改善患肢抬高,缩短住院日,降低吗啡使用量,同时也未增加恶心呕吐发生率。

切开与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定疗效的Meta分析

目的通过Meta分析比较切开与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定的临床疗效差异。方法检索包括国内、外1954年1月至2018年1月已发表的临床对照研究。所检索的数据库包括Embase、Pubmed、Central、Cinahl、PQDT(ProQuest Dissertations and Theses)、中国知网、维普、万方、Cochrane Library、CBM(China Biology Medicine)等数据库。中文检索的关键词为切开、开放、关节镜、Latarjet,检索策略为Latarjet并且切开或关节镜或开放。英文检索的关键词为Open、Arthroscopy、Latarjet,检索策略为Latarjet AND Open OR Arthroscopic。提取数据后,采用Review Manager 5.3软件进行数据分析,比较关节镜下与开放式Latarjet手术间的疗效差异。结果依据以上检索策略,共检索到相关文献887篇,并最终纳入7篇外文文献。通过比较发现,在Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定时,开放式组术后Rowe评分优于关节镜下组[95%CI,(0.03,3.25),P=0.05],而且开放式组术后骨块移位情况[95%CI(0.12,0.88),P=0.03]及患者焦虑程度[95%CI(0.20,0.75),P=0.005]均少于关节镜下组,其差异具有统计学意义。其余结局指标术后Walch-Duplay评分[95%CI(-9.57,10.65),P=0.92];术后肩关节活动度[95%CI(-2.32,7.64),P=0.30];术中及术后各种并发症发生率[95%CI(0.42,3.39),P=0.74]、[95%CI(0.14,2.49),P=0.48]、[95%CI(0.77,14.09),P=0.11]、[95%CI(0.46,4.89),P=0.51]、[95%CI(0.12,0.88),P=0.03]、[95%CI(0.12,7.22),P=0.94];术后复发率[95%CI(0.21,3.56),P=0.85];术后视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)[95%CI(-0.25,2.92),P=0.10];手术所需时间[95%CI(-70.10,11.81),P=0.10]两组间差异均无统计学意义。结论开放式与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定均能取得良好的治疗效果,且并发症及复发率相当。虽然开放式组在术后Rowe评分、术后骨块移位情况和患者焦虑程度三个指标上均优于关节镜下组,但是关节镜手术仍不失为是一种安全可行的治疗选择.