抗钠-钙交换体α-1(106-145)抗体对大鼠离体心功能的影响及其机制

目的观察1～103nmol·L-1抗钠-钙交换体(NCX)α-1(106-145)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响并分析其作用机制。方法用化学合成的NCXα-1(106-145)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠离体心功能的影响;利用全细胞膜片钳技术观察其对心肌细胞钠-钙交换电流、L-型钙电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响。结果经主动免疫后兔体内抗α-1(106-145)抗血清滴度明显升高,Protein A纯化后抗体浓度为13.1 g.L-1。与对照组相比,1～10 nmol·L-1α-1抗体可使大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)和左室压最大上升速率(+dp/dtmax)明显增加(P<0.01),并使左室压最大下降速率(-dp/dtmax)减小(P<0.01),且KB-R7943(2μmol·L-1)可使α-1抗体(1 nmol·L-1)的上述效应进一步增强。然而,102～103nmol·L-1α-1抗体则可使大鼠离体心脏LVDP、±dp/dtmax呈不同程度地下降(P<0.01)。全细胞膜片钳实验结果表明,在1～103nmol·L-1浓度范围内,抗α-1抗体对大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现出剂量依赖性的抑制效应,对瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无明显影响。此外,102～103nmol·L-1α-1抗体对L-型钙电流也具有抑制作用。结论低浓度α-1抗体(1～10 nmol·L-1)可明显增强心肌收缩,这一效应与其在低浓度时专一性抑制Na+/Ca2+交换电流有关;高浓度α-1抗体(102～103nmol·L-1)则可同时抑制心肌收缩和舒张,该作用与其同时抑制Na+/Ca2+交换电流和L-型钙电流有关。

熊果酸通过抑制内质网应激减轻高糖和棕榈酸诱导的人主动脉内皮细胞焦亡的研究

目的探讨熊果酸对高糖高脂诱导人主动脉内皮细胞损伤的影响和机制。方法将人主动脉内皮细胞随机分为对照组、模型组和低、高剂量实验组。模型组用30 mmol·L^(-1)葡萄糖和0.1 mmol·L^(-1)棕榈酸钠刺激内皮细胞24 h以构建高糖高脂损伤模型;低、高剂量实验组分别预孵1和5μmol·L^(-1)熊果酸4 h,随后加入30 mmol·L^(-1)葡萄糖和0.1 mmol·L^(-1)棕榈酸钠处理24 h;对照组给予正常培养。用蛋白质印迹法检测细胞内质网应激及炎症蛋白、活化胱天蛋白酶^(-1)(cleaved caspase-1)和gasdermin D-N(GSDMD-N)的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测细胞培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的含量。结果低、高剂量实验组、模型组和对照组的葡萄糖调节蛋白78相对表达水平分别为0.78±0.07、0.76±0.08、1.02±0.02和0.67±0.03,活化转录因子6相对表达水平分别为0.80±0.03、0.72±0.04、0.88±0.03和0.69±0.02,磷酸化蛋白激酶样内质网激酶相对表达水平分别为0.66±0.08、0.64±0.07、0.96±0.04和0.51±0.06,磷酸化肌醇依赖酶-1α相对表达水平分别为0.82±0.03、0.67±0.06、0.95±0.01和0.67±0.06,硫氧还蛋白互作蛋白相对表达水平分别为0.85±0.04、0.80±0.03、0.97±0.02和0.68±0.02,核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3相对表达水平分别为0.84±0.04、0.70±0.05、1.01±0.03和0.66±0.05,cleaved caspase-1蛋白相对表达水平分别为0.09±0.03、0.08±0.02、0.26±0.05和0.17±0.04,GSDMD-N蛋白相对表达水平分别为0.53±0.10、0.54±0.03、0.89±0.07和0.65±0.11,IL-1β含量分别为(3.02±0.24)、(2.51±0.23)、(4.73±0.32)和(2.00±0.16)pg·mL^(-1),TNF-α含量分别为(26.97±2.65)、(22.32±2.50)、(35.18±2.21)和(16.86±1.61)pg·mL^(-1),IL-6含量分别为(91.45±7.12)、(74.22±6.46)、(104.90±4.60)和(49.34±3.94)pg·mL^(-1)。低、高剂量实验组和对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论熊果酸改善高糖高脂诱导的人主动脉内皮细胞损伤可能通过抑制内质网应激减轻炎症,进而抑制焦亡的发生。