快速蛋白液相色谱系统阴离子交换层析纯化人抗地高辛单链抗体

目的:将快速蛋白液相色谱系统(FPLC)与阴离子交换层析相结合,探索在大肠杆菌(E.coli)分泌表达的人抗地高辛(Dig)单链抗体(ADAscFv)的纯化条件. 方法:①通过培养E.coli HB2151将人ADAscFv分泌表达至培养基中,离心制备培养基上清;②加入硫酸铵,收集其饱和度为0～50%的组分即为初步纯化的人ADAscFv;③将阴离子交换色谱柱与FPLC相连接后上样,分别采用含NaCl的Tris-HCl缓冲液进行线性浓度梯度洗脱及阶梯浓度梯度洗脱,紫外分光光度计自动检测洗脱峰;④通过ELISA及SDS-PAGE分别分析回收样品中人ADAscFv的抗原结合活性及纯度.结果:①2种洗脱方法均有6个洗脱峰;② ELISA显示,第2个洗脱峰回收样品中的抗原结合活性最高;③SDS-PAGE显示,第2个洗脱峰回收样品呈现与人ADAscFv分子量相符的单一条带.结论:该方法能有效地纯化在E.coli分泌表达的人ADAscFv.