低剂量雷公藤内酯醇和索拉非尼单药及其联用对AML细胞株MV411及其STAT5信号通路的作用

目的:探讨低剂量雷公藤内酯醇、索拉非尼单药及二者联合对FLT3-ITD突变阳性人急性髓系白血病细胞株MV4-11细胞的抑制增殖和诱导凋亡的作用,以及对STAT5通路的影响。方法:采用低剂量雷公藤内酯醇(IC20)和索拉非尼(IC50)单药及二者联合作用于MV4-11细胞,在48h时间点,用CCK-8试剂盒测定各组细胞的增殖抑制情况,用流式细胞术检测凋亡率,采用RT-PCR法测定FLT3、STAT5mRNA表达水平,Western blot法测定FLT3、STAT5、P-STAT5蛋白的表达水平。结果:雷公藤内酯醇、索拉非尼单药及二者联合用药48h对MV4-11细胞株有抑制增殖和诱导凋亡的作用,联合用药组抑制率及凋亡率均高于单药组,联合用药组FLT3、STAT5通路基因及蛋白的表达显著低于单药组。结论:低剂量雷公藤内酯醇联合索拉非尼可协同抑制MV4-11细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与抑制FLT3及STAT5通路有关。

BRD4抑制剂JQ1对Jurkat细胞增殖抑制及凋亡诱导作用的研究

目的:探讨布罗莫结构域抑制剂(JQ1)对急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)的增殖抑制、诱导凋亡作用以及可能的作用机制。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测JQ1作用于Jurkat细胞后的细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,实时荧光定量PCR检测Notch1及c-Myc基因表达水平。结果:随药物浓度的增加,Jurkat细胞生长受到明显抑制,表现为时间-剂量依赖性。JQ1 0.8、1.6、4μmol/L处理Jurkat细胞48和72 h后,Jurkat细胞株的凋亡率呈时间-剂量变化,与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。PCR检测显示,药物作用48 h后Notch1及c-Myc mRNA表达均下调,与对照组相比,有显著差异。结论:JQ1可以有效抑制Jurkat细胞株的增殖,这可能是通过Notch1基因和c-Myc基因促进凋亡。JQ1可以作为治疗T-ALL新途径之一。

肝脾T细胞淋巴瘤诊治进展

肝脾T细胞淋巴瘤是一种特殊类型的外周T细胞淋巴瘤,因其肝脾增大的病理特点及表达γδT细胞受体的分子学特征而命名。其特点是肿瘤细胞主要分布于结外,尤其是肝、脾及骨髓的窦内浸润,从而导致肝脾肿大、外周血细胞减少等一系列临床表现。该病临床罕见,高度侵袭性,临床表现无特异性,诊断及治疗十分困难,常规化疗效果差,预后极差。为提高对该疾病的认识,及早识别诊断,探讨其治疗策略,本文从病因、临床表现、诊断及治疗等方面作一综述。

雷公藤甲素对MV4-11细胞增殖的影响及RAS／ERK／MAPK通路相关机制研究

目的探讨雷公藤甲素（TP）对Fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复（FLT3一ITD）突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4—11的增殖、凋亡影响及RAS／细胞外信号调节激酶／丝裂原活化蛋白激酶（ERK／MAPK）通路相关机制。方法用不同浓度的TP分别处理MV4—11细胞，在不同的时间点，采用四甲基偶氮唑蓝法测定增殖抑制率，流式细胞术测定凋亡率，实时荧光定量PCR法测定FLT3、RAS、ERK、叉头框蛋白M1（FOXM1）、c—Myc的mRNA表达水平。结果TP处理MV4—11细胞后，其增殖抑制率明显增高，且呈剂量一时间依赖性；10、20nmol／L的TP分别处理MV4-11细胞，48h的凋亡率分别为（17．30±0．56）％、（35．77±0．55）％，72h的凋亡率分别为（49．83±0．45）％、（68．90±0．75）％；PCR显示FLT3mRNA的表达明显下降，RAS、ERK、FOXM1、c—Myc的mRNA的表达均降低。结论TP能明显抑制MV4—11细胞的增殖并诱导细胞凋亡，其作用机制是通过抑制RAs／ERK／MAPK通路相关基因的表达发挥作用。

雷公藤甲素对HL-60细胞甲基化状态的影响

目的 研究中药雷公藤甲素（TP）对人髓系白血病细胞系HL-60细胞甲基化状态的影响,并对其去甲基化作用机制进行初步探讨.方法 用0、3.125、6.250、12.500、25.000 nmol/L TP分别处理HL-60细胞24、48 h,采用MTT法检测细胞增殖水平;用流式细胞术检测3.125、6.250nmol/L TP作用HL-60细胞48 h细胞凋亡率及细胞周期变化;用实时荧光定量PCR检测HL-60细胞死亡相关蛋白激酶DAPK-1、甲基转移酶DNMT1、DNMT3B mRNA的表达;用甲基化特异性PCR检测HL-60细胞LINE-1、DAPK-1基因甲基化程度的改变.结果 与对照组相比,不同浓度TP能明显抑制HL-60细胞增殖,呈时间-剂量依赖性（P＜ 0.05,P＜ 0.01）;6.250 nmol/L TP作用HL-60细胞48h细胞早期凋亡率与未加药对照组相比明显升高[（9.77±3.52）％对（2.07±1.91）％,P＜0.05];HL-60细胞DAPK-1 mRNA表达水平随TP浓度的增加而增加（P＜0.01）,而DNMT1、DNMT3B mRNA表达则明显受抑（P＜0.01）;对照组HL-60细胞的LINE-1、DAPK-1基因呈高甲基化状态,经TP作用后LINE-1、DAPK-1基因的甲基化条带减弱,非甲基化条带增强,均呈剂量依赖性.结论 TP可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过下调甲基转移酶基因DNMTl/3B mRNA的表达,降低LINE-1、DAPK-1基因甲基化程度,使DAPK-1基因表达上调实现的.

雷公藤甲素诱导K562/G01细胞凋亡的线粒体机制研究

目的 探讨雷公藤甲素（TP）诱导慢性粒细胞白血病（CML） K562/G01细胞凋亡的线粒体可能机制.方法 用不同浓度的TP作用于K562/G01细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各实验组的细胞毒性作用,用流式细胞术检测各实验组细胞的凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-9活性,用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测Caspase-9及细胞色素C的mRNA水平,用Western blot检测细胞色素C的蛋白水平.结果 TP对K562/G01细胞的生长增殖均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性（均P＜ 0.001）.同时TP可以使细胞的线粒体膜电位消退、使Caspase-9的活性增高（均P＜ 0.001）,TP上调Caspase-9和细胞色素C的转录水平（均P＜0.001）及细胞色素C的蛋白表达水平（0、10、20、40、80 nmol/LTP作用48 h后,细胞色素C对应条带灰度值分别为10.54±0.75、21.54±0.59、39.63±0.58、53.29±1.47、75.68±1.87,均P＜ 0.001）,且上述作用均呈明显的剂量依赖性.结论 雷公藤甲素可以有效抑制K562/G01细胞生长增殖,而线粒体凋亡途径很可能是TP促进CML细胞凋亡的多途径之一.

汉防己甲素对HL-60细胞DNA甲基转移酶表达的影响

目的 探讨汉防己甲素（Tet）对HL-60细胞DNA甲基转移酶（DNMT）表达的影响.方法 以地西他滨（DAC）为对照,用不同浓度的Tet作用于HL-60细胞,用四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞术检测细胞毒性;用实时荧光定量聚合酶链反应法、Western Blot检测DNMT mRNA及蛋白的表达.结果 Tet对HL-60细胞的生长增殖均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性（P＜0.01）;2、4μmol/LTet单药作用48 h后DNMT mRNA表达水平与对照组相比均降低,且有剂量依赖性,2μmol/L Tet与4 μnol/L DAC联合后DNMT mRNA表达下降均明显大于各单药组,差异有统计学意义（P均＜0.05）;Tet单药作用48 h后DNMT蛋白表达均降低,与DAC联合后下降更明显.结论 Tet可有效抑制HL-60细胞生长增殖,下调DNMT mRNA及蛋白的表达,与DAC联合后作用更强.