人尿胰蛋白酶抑制剂的快速纯化

目的以人尿浓缩物为原料 ,对人尿胰蛋白酶抑制剂的分离纯化技术进行研究。方法利用纯胰蛋白酶作为配体偶联于CNBr Sepharose 4B为亲和载体 ,在不同条件下洗脱亲和蛋白 ,可从粗品溶液中快速分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的两种纯产物。结果层析图谱与SDS PAGE分析表明 ,根据洗脱条件 ,可将有抑制活性的 2 0kD和 40kD蛋白质分离为两个单独组份或混合物。其中 2 0kD组份的抑制活性回收为 35 % ,抑制比活为 3 387U/mg;40kD组份的相应值分别为 5 3 %和 3 116U/mg。混合物的抑制活性回收和抑制比活分别为 89%和 3 0 76U/mg ,再经Su perose 12或Superdex 75凝胶渗透层析 ,分别获得两种组份的纯产物。 结论通过选择性洗脱亲和柱 ,可快速获得高收率。