CYP17基因多态性与大同地区早期复发性自然流产关系研究

目的探讨CYP17基因多态性与大同地区早期复发性自然流产的关系。方法采用PCR-RFLP分别检测山西大同地区的不明原因早期复发性自然流产(58例)和健康妊娠妇女(73例)的CYP17基因多态性,分析探讨两者的关系。结果早期复发性自然流产组和对照组之间CYP17 3种基因型分布具有统计学意义(χ2=7.817,P=0.020)。A2/A2、A1/A2发生早期复发性自然流产的危险度分别提高了3.181倍和3.123倍。结论 CYP17等位基因突变可增加发生早期复发性自然流产的危险性,可能是早期复发性自然流产的遗传易感因素之一。

Tim-3/Gal-9信号通路参与妊娠的研究进展

成功的妊娠依赖于母体对胎儿的免疫耐受。近年来研究证实：Tim-3/Gal-9信号通路通过抑制Th1细胞的活性、Th17细胞的分化和功能以及促进Th2细胞的功能,调节T细胞亚群平衡和诱导外周免疫耐受。Tim-3/Gal-9信号通路在母胎界面和妊娠中的功能已经在人和动物模型中有较多报道。本文将从Tim-3/Gal-9信号通路调节T细胞平衡这一生物学功能着手,阐明其在母胎免疫耐受的诱导和维持，

复发性流产患者妊娠早期滋养细胞中E-cadherin的表达及其与HPV感染的相关性

目的:研究E-钙粘素(E-cadherin)在复发性流产患者妊娠早期滋养层细胞中的表达,探讨复发性流产与HPV感染的相关性。方法:采用免疫组织化学与PCR法分别对34例复发性流产患者(实验组)与41例正常早孕女性(对照组)妊娠早期滋养层细胞中E-cadherin的表达水平与HPV-DNA进行检测。结果:实验组滋养细胞中E-cadherin的表达明显低于对照组(P<0.001),HPV感染率则高于正常早孕组(P=0.039);HPV感染阳性的标本中,实验组E-cadherin的表达水平要低于正常早孕组,其差异有显著性(P=0.015)。结论:妊娠早期滋养层细胞E-cadherin的异常表达可能与复发性流产的发生有关,而人乳头瘤病毒(HPV)可能参与这一过程。

不明原因复发性流产小鼠模型CD4^+CD25^+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。

Th17和Treg细胞及其比例在先兆流产中的变化及意义

目的检测外周血Th17细胞和调节性T细胞(Treg细胞)在先兆流产发病机制中的作用。方法入组健康早孕妇女24例和先兆流产孕妇37例,采用三色荧光流式细胞分析技术检测2组孕妇外周血中Th17细胞和Treg细胞占CD4+T细胞的比例,使用SPSS16.0分析相关数据。结果先兆流产孕妇与健康早孕妇女既往均无自然流产史,外周血中,先兆流产孕妇Th17细胞占CD4+T细胞的比例显著高于健康早孕妇女(P<0.05),而Treg细胞占CD4+T细胞的比例显著低于健康早孕妇女(P<0.05),且Th17/Treg细胞比例在先兆流产孕妇中明显升高(P<0.05)。结论外周血Th17和Treg细胞水平异常及两者比例失衡可能参与先兆流产的发生。

5-氮-2'-脱氧胞苷诱导的调节性T细胞转输对自然流产孕鼠妊娠结局的影响

目的:研究过继转输5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5Aza D)诱导的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(inducible regulatory T cells,i Tregs)对自然流产孕鼠妊娠预后的影响。方法:以60例雌性CBA/J×雄性DBA/2J小鼠自然流产模型为研究对象,随机选取20例孕鼠经免疫磁珠分选脾脏CD4+T细胞,应用5Aza D对CD4+CD25-T细胞进行体外处理得到i Tregs,通过流式细胞术检测表观修饰前后Tregs细胞中Foxp3的表达。分别向妊娠第1天和第4天的流产孕鼠体内输注i Tregs作为治疗组,于妊娠14天比较各组孕鼠的胚胎吸收率。结果:经5Aza D修饰后,i Tregs占CD4+T细胞的比例为(41.50±8.03)%。治疗组中妊娠第1天和第4天过继转输i Tregs孕鼠的胎盘吸收率分别为10.47%和21.69%(P<0.05)。结论:对CD4+CD25-T细胞的表观修饰可能解决自然调节性T细胞来源不足的问题,在妊娠早期转输5Aza D诱导的i Treg细胞更有利于维持正常妊娠。

通过母血中胎儿表观遗传学标记物预测子痫前期的探讨

目的通过实时荧光定量PCR法测定孕妇血浆中胎儿表观遗传学标记物非甲基化丝氨酸蛋白酶抑制剂B5(un-methylated serpin peptidase inhibitor,clade B,member 5,U-maspin)基因的含量,初步探讨母血浆中U-maspin基因的定量能否预测子痫的发生.方法随机选择子痫前期孕妇40例为实验组,其中轻度和重度患者各20例,以健康同期妊娠妇女20例为对照组.提取血浆游离DNA,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组血浆标本中U-maspin基因的含量.结果子痫前期组孕妇血浆中U-maspin的水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),轻、重度子痫前期患者平均浓度有差异,分别为1 402.05 copies/mL及2 189.60 copies/mL(P<0.05).结论U-maspin基因作为孕妇血浆中游离的胎儿特异性表观遗传学标记物,可以预测子痫的发生.

复发性自然流产患者血清RLX-2,TIMP-1,TIMP-2的表达及其临床诊断价值

目的检测复发性自然流产(RSA)患者血清RLX-2,TIMP1,TIMP2的表达水平,探讨RLX-2,TIMPs在RSA发生过程中的作用机制,及其对RSA的临床诊断价值。方法采用ELISA法对18例RSA患者与18例正常妊娠者不同妊娠期血清RLX-2,TIMP1,TIMP2的表达水平进行检测,采用受试者工作特性曲线对血清RLX-2,TIMP2及RLX-2/TIMP-2比值在RSA临床诊断的价值进行评价。结果血清RLX-2的水平在妊娠呈上升趋势,10～12周达到高峰;实验组血清TIMP-2水平在各妊娠期均高于正常组(P<0.05),各妊娠期RLX-2/TIMP-2比值的曲线下面积(AUC)均较RLX-2,TIMP-2高,其最佳拐点为≤0.1(P<0.000 1)。结论RSA的发生可能与妊娠期RLX-2的分泌不足以及过高的血清TIMP-2浓度有关;妊娠10～12周时RLX-2/TIMP-2比值≤0.1对RSA的临床诊断价值最大。

胎源性SERPINB5基因水平与子痫前期发病的相关性研究

目的:探讨子痫前期患者在临床症状出现之前血浆中胎源性非甲基化丝氨酸蛋白酶抑制剂B5(serpin peptidase inhibitor,clade B,member 5,SERPINB5)基因含量的变化及其与该病发生的相关性。方法:选取孕妇325例,分别在其孕7～12周、孕13～18周及孕19～24周抽取外周血,提取血浆游离DNA,采用Taqman探针结合甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测各模板DNA经亚硫酸氢盐修饰后非甲基化SERPINB5基因的含量,代表胎儿游离DNA水平,同时监测孕妇血压、尿蛋白值及临床表现,将最终发展为子痫前期的孕妇列入观察组,从正常孕妇中随机选取30例列入对照组,回顾性分析两组孕妇血浆中非甲基化SERPINB5基因水平的差异。结果:325例孕妇中26例发展为子痫前期患者,妊娠7～12周血浆中非甲基化SERPINB5基因含量与对照组差异无统计学意义(P>0.05);妊娠13～18周实验组该基因平均含量为139.56copies/ml,正常妊娠组为101.04copies/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);妊娠19～24周实验组该基因含量为对照组的2.06倍。结论:妊娠中期孕妇血浆中非甲基化SERPINB5基因水平的异常变化有望实现子痫前期的早期预测。

腹腔高压对腹腔间隔室综合征中TNF-α、IL-6、IL-10的影响

目的通过建立腹腔高压动物模型,观察腹腔高压对腹腔间隔室综合征(abdominal compartment syndrome,ACS)中肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-10的影响。方法6只实验猪,通过(n+1)多水囊叠加加压法建立腹腔高压动物模型,至腹腔压力(intra-abdominal pressure,IAP)分别为0 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、5 mmHg、10 mmHg、15 mmHg、20 mmHg、25 mmHg、30 mmHg,各维持15 min。经耳缘静脉导管抽静脉血5 mL,进行炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10检测;标本采集时间节点包括制模前、在增压后IAP为0、5、10、15、20、25、30 mmHg。通过重复测量资料的方差分析比较制模前和制模过程中炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10组间差异,采用Spearman相关分析炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10水平与IAP的关系。结果6只实验动物均成功制作腹腔高压动物模型,制模过程顺利。在腹腔高压动物模型制模前和制模过程中不同的腹腔压力点,炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10水平差异均有统计学意义(均P<0.001),TNF-α和IL-6逐渐升高,IL-10逐渐下降。腹腔高压动物模型制模升压过程中,腹腔高压动物模型制模升压过程中炎症细胞因子TNF-α和IAP呈正相关关系(rs=0.649,P<0.05),炎症细胞因子IL-6和IAP无相关关系(rs=0.129,P>0.05),炎症细胞因子IL-10和IAP呈负相关关系(rs=-0.762,P<0.05)。结论在ACS发生发展过程中,IAP的升高促进了TNF-α、IL-6、IL-10的不同规律的表达。

猪腹腔高压模型的建立及腹腔高压对门静脉血炎症细胞因子表达的影响

目的探讨猪腹腔高压动物模型的建立方法,以及腹腔高压对门静脉血中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10等炎症细胞因子表达的影响。方法选取健康家猪6只,体质量25.2~28.4(26.86±0.85)kg。采用多水囊叠加方法制备腹腔高压动物模型,并放置门静脉导管。在腹腔高压动物模型制备前和模型制备过程中腹腔压力为0、5、10、15、20、25、30 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)时,分别抽取门静脉血5 mL,采用免疫荧光法检测其中炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达水平。观察对比制备腹腔高压动物模型前及制备过程中不同腹腔压力时门静脉血中TNF-α、IL-6、IL-10的变化情况,采用简单线性回归分析TNF-α、IL-6、IL-10表达水平与腹腔压力的关系。结果6只实验动物均成功完成模型制备,实验过程中无死亡。腹腔压力达到30 mmHg时腹腔水囊注入液量为2560~2720 mL。腹腔高压动物模型制备前及制备过程中不同腹腔压力点,门静脉血中炎症细胞因子TNF-α、IL-10表达水平呈先上升后下降趋势,IL-6表达水平呈上升趋势,差异均有统计学意义(F=15.66、40.37、34.67,P值均<0.001)。线性回归分析显示:TNF-α表达水平与腹腔压力呈负相关性,回归方程分别为Y_(TNF-α)=-0.013X腹腔压力+1.346(R^(2)=0.341,P<0.001);IL-6、IL-10表达水平均与腹腔压力呈正相关,回归方程分别为Y_(IL-6)=0.013X腹腔压力+0.222(R^(2)=0.777,P<0.001),Y_(IL-10)=0.022X腹腔压力+0.402(R2=0.642,P<0.001)。结论采用多水囊叠加方法可成功制备腹腔高压动物模型。腹腔压力的升高,促进IL-6的表达,对TNF-α、IL-10的表达先促进后抑制。腹腔高压加重了机体的炎症反应。

孕妇血浆中胎儿表观遗传标记的检测效率评价

目的 分析母血中非性别依赖的胎儿表观遗传学标记超甲基化Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因的检测效率,探讨其替代SRY基因检测游离胎儿DNA的可行性. 方法 选择2011年5月1日至2012年4月30日于山西省大同市第一和第五人民医院进行产前检查的正常妊娠妇女50例,分别于妊娠早、中、晚期采集外周静脉血,胎儿出生后确定为男胎的孕妇（28例）为研究对象.选择20例同期体检的健康未妊娠女性作为阴性对照.通过甲基化敏感的限制性内切酶消除母源性（非甲基化）RASSF1A基因,采用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应检测胎源性（超甲基化）RASSF1A基因,同时测定孕妇血浆中SRY基因并作为参照,对检测结果进行相关性分析.统计学方法采用Shapiro-wilk分析、Pearson或Spearman秩相关分析和x2检验. 结果 28例男胎孕妇共进行84次检测,超甲基化RASSF1A基因最早于妊娠第8＋2周检出,检出率97.62％（82/84）.对照组未检测到超甲基化RASSF1A基因和SRY基因.妊娠早、中、晚期孕妇血浆中酶切后RASSF1A基因及SRY基因的含量分别为（60.19±14.16） copies/ml与（58.22±15.13） copies/ml（r=0.933,P＜0.01）、（99.18±28.44） copies/ml与（95.43±32.33） copies/ml（r=0.931,P＜0.01）、（144.93±33.51） copies/ml与（132.96±28.24） copies/ml（r=0.654,P＜0.01）.酶切后RASSF1A和SRY基因含量均与孕周呈正相关（r分别为0.933和0.896,P均＜0.01）. 结论 检测表观遗传学标记超甲基化RASSF1A基因所得的游离胎儿DNA结果与SRY基因具有较高的一致性,该基因突破了胎儿性别的局限,有助于扩大无创伤性产前诊断的临床应用范围.

流产模型孕鼠脾脏调节性T细胞分离纯化方法的初步建立

目的探索流产模型孕鼠CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞快速高效的分选方法。方法采用免疫磁珠两步法分离流产模型孕鼠脾脏中T细胞,分离后的细胞经台盼蓝染色检测细胞存活率,经流式细胞仪检测分离的纯度。结果流产模型孕鼠脾脏细胞经过免疫磁珠细胞分选法2次分选得到CD4+/CD25+调节性T细胞纯度为(93.5±1.1)%,CD4+/CD25-T细胞纯度为(96.6±0.6)%。结论采用免疫磁珠细胞分选法能够快速高效的得到高纯度的CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞。