miR-370-3p对抑郁症大鼠抑郁样行为和神经元损伤的影响

目的探究miR-370-3p对抑郁症大鼠的抑郁样行为和神经元损伤的影响。方法采用在线预测软件TargetScan3.1分析miR-370-3p和RUNX1的靶向关系,并通过双荧光素酶报告实验验证其靶向关系,构建过表达miR-370-3p、RUNX1的293T细胞株,采用qPCR和Western blotting分别检测细胞中miR-370-3p及RUNX1 mRNA和蛋白的表达。将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、NC agomiR、miR-370-3p agomiR、Ad-RUNX1组和miR-370-3p+RUNX1组,每组10只。采用慢性不可预见性温和刺激方法构建抑郁症大鼠模型。对各组大鼠进行旷场实验、糖水偏好实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测大鼠抑郁行为,采用HE染色观察大鼠海马病理变化。结果与模型组相比,miR-370-3p agomiR组大鼠下丘脑细胞损伤明显减轻,miR-370-3p表达、旷场实验中总移动距离、蔗糖偏好度、进入开放臂及闭合臂次数明显增加,而强迫游泳实验不动时间明显减少(均P<0.05)。miR-370-3p和RUNX1存在靶向关系,与Ad-RUNX1组比较,miR-370-3p+RUNX1组293T培养细胞中RUNX1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);与Ad-RUNX1组比较,miR-370-3p+RUNX1组大鼠旷场实验总移动距离、蔗糖偏好度、进入开放臂及闭合臂次数明显增加,强迫游泳实验不动时间明显降低,下丘脑细胞损伤明显减轻(均P<0.05)。结论miR-370-3p可显著改善抑郁症大鼠抑郁样行为,减轻其神经元损伤,可能与其靶向抑制RUNX1的表达有关。

miR-34a通过靶向SIRT1对MPP+诱导的帕金森病模型细胞凋亡和氧化应激损伤的影响

目的:探讨miR-34a通过靶向SIRT1对MPP+诱导的帕金森病模型细胞凋亡和氧化应激损伤的影响。方法:以MPP+处理SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测细胞中miR-34a和SIRT1 mRNA的表达,Western blot检测SIRT1蛋白的表达。脂质体介导转染miR-34a模拟物和miR-34a抑制剂,RT-PCR和Western blot检测miR-34a对SIRT1 mRNA和蛋白表达的影响。采用荧光素酶实验检测miR-34a与SIRT1的靶向关系。将miR-34a抑制剂和SIRT1干扰序列转染至SH-SY5Y细胞后,采用流式细胞仪和LDH、SOD、MDA试剂盒分别检测miR-34a低表达靶向SIRT1对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡和氧化应激损伤的影响。结果:与对照组相比,500μmol/L、1000μmol/L和2000μmol/L MPP+能够降低SH-SY5Y细胞的存活率、上调miR-34a和下调SIRT1表达(P<0.05),且呈浓度依赖性。miR-34a模拟物可引起SIRT1 mRNA和蛋白表达降低,miR-34a抑制剂可引起SIRT1 mRNA和蛋白表达升高;荧光素酶实验证实SIRT1是miR-34a的靶基因。2000μmol/L MPP+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,细胞上清液中MDA含量和LDH活性显著升高,而SOD活性降低;转染miR-34a抑制剂成功下调miR-34a表达后可逆转MPP+引起的上述变化,而转染SIRT1干扰序列成功下调SIRT1表达后可减弱miR-34a低表达引起的上述变化。结论:miR-34a低表达可通过靶向调控SIRT1抑制MPP+诱导的帕金森病模型细胞凋亡和氧化应激损伤。

法舒地尔修饰的巨噬细胞治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的分子机制

目的探讨法舒地尔修饰的巨噬细胞治疗实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的分子机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导C57BL/6小鼠建立主动免疫EAE模型,免疫9 d后制备腹腔巨噬细胞,用PBS或法舒地尔处理72 h(对照组和实验组)。将对照组和实验组巨噬细胞经尾静脉回输至EAE模型小鼠中,每只5×10^(7)个细胞。治疗10 d后分析对照组和实验组小鼠临床行为和体质量变化;经腹腔分离2组小鼠巨噬细胞,采用流式细胞术分析2组M1和M2型巨噬细胞比例;采用荧光定量PCR分析M1和M2巨噬细胞标志物的表达情况;采用ELISA分析白细胞介素(IL)-10和IL-12的水平。结果实验组小鼠临床症状评分较对照组下调,差异有统计学意义(F=6.135,P<0.001)。与对照组比较,实验组小鼠体质量下降较少,差异有统计学意义(F=3.105,P=0.011)。与对照组细胞比较,实验组细胞M2型标志物精氨酸酶(Arg-1)、YM-1和FIZZ mRNA与IL-10细胞因子水平升高,M1型标志物一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和IL-12细胞因子水平下降,差异均有统计学意义(t=7.091,P<0.001;t=11.094,P<0.001;t=6.182,P<0.001;t=3.942,P<0.001;t=4.132,P<0.001;t=3.198,P<0.001)。与对照组相比较,实验组的F4/80^(+)CD206^(+)巨噬细胞比例增加,而F4/80^(+)CD16/32^(+)巨噬细胞比例下调,差异有统计学意义(t=10.618,P<0.001;t=12.105,P<0.001)。结论法舒地尔修饰的巨噬细胞可改善EAE小鼠的临床症状,主要是通过改善机体巨噬细胞极性实现的。