重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF Ⅰ表达的影响。方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究。结果在摇床转速为 15 0、2 0 0、2 5 0r min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x △s分别为 0 .2 0 3、0 .2 7、0 .33。干细胞产量分别为 0 .5 4、0 .76 5、1.0 5 4g L。平均生长速率分别为 0 .0 34、0 .0 4 8、0 .0 6 6g (L·h)。细胞对数生长期分别为 6、7.5、10h。发酵罐上生物量由分批发酵的 18(A6 0 0nm)提高到补料分批发酵的 35 (A6 0 0nm) ,表达量占细胞可溶性总蛋白质的10 %。结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期 ,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF

截短型人胰岛素样生长因子-Ⅰ 在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定

利用PCR、删除突变和基因重组技术构建了N端缺失3个氨基酸的人胰岛素样生长因子-[des(1-3)IGF-]的表达载体pExSec/IGF,在大肠杆菌蛋白酶缺陷株BL21(DE3)中,通过用IPTG于超常规的12℃低温诱导16h,des(1-3)IGF-获得了可溶性表达。表达水平达到可溶性细菌总蛋白约15%。经超滤和SephadexG-50凝胶过滤,des(1-3)IGF-纯度分别达到49%和82%,且表现出明显的免疫学活性和刺激Balb3T3细胞增殖的生物学活性。