一个新的蛋白质剪切系统及其剪切条件的研究

将含麦芽糖结合蛋白－内蛋白子－几丁质结合区（简称ＭＹＢ）基因的重组质粒ｐＭＹＢ１２９转入Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６，在ＬＢ培养基中发酵，ＩＰＴＧ低温诱导表达，菌体超声破碎，离心，上清液经直链淀粉糖亲和层析，获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯的前体蛋白ＭＹＢ．ＭＹＢ中内蛋白子的Ｎ端可被还原剂ＣｙＳＨ、ＤＴＴ、β－巯基乙醇等诱导发生剪切反应．结果表明，三种还原剂中以ＤＴＴ为最佳．同时对剪切过程中温度。

人乙酰胆碱受体α-亚基在大肠杆菌中的表达

目的 通过将乙酰胆碱受体(AchR)α亚基与分子伴侣蛋白(Chaperonin)共表达,减少包涵体含量,提高可溶性目的蛋白含量。方法 将乙酰胆碱受体α亚基结构域基因的重组质粒pPR506与含分子伴侣蛋白GroESL基因的重组质粒pGE60一起转入E.coliDH5α,并在IPTG诱导下共表达。结果 由于分子伴侣蛋白具有协助重组蛋白再折叠的功能,其共表达产物与仅含pPR506的工程菌单一表达产物相比,前者增加了以非包涵体形式的表达。产物经SDSPAGE、免疫印迹试验与FPLC分离等分析,均表明该工程菌的共表达产物为AchRα亚基结构域(相对分子质量为13×103)及其与GroES的络合物(23×103)。结论 分子伴侣蛋白帮助了重组蛋白在菌体内的正确折叠,提高了目的蛋白的可溶性。