电针联合骨髓间充质干细胞治疗化疗致大鼠卵巢功能不全

背景:骨髓间充质干细胞治疗卵巢功能不全有不错的效果,但仍存在归巢效率低、效果欠佳等问题。目的:探讨电针疗法联合骨髓间充质干细胞治疗化疗型卵巢功能不全的效果。方法:从32只SD大鼠中随机选择8只做正常组,其余随机分为卵巢功能不全组、干细胞组、联合组,每组8只,采用腹腔注射环磷酰胺溶液制备卵巢功能不全动物模型。造模结束后,正常组不做处理,卵巢功能不全组尾静脉注射1 mL生理盐水,干细胞组与联合组尾静脉注射1 mL骨髓间充质干细胞悬液(细胞数为2×106),联合组大鼠进行电针治疗,30 min/d,持续7 d,治疗结束后取心脏血与卵巢组织观察疗效。结果与结论:①与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠血清雌二醇激素水平明显升高,卵泡刺激素水平明显降低;②与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢卵母细胞数量明显增加;③与干细胞组相比,联合组的骨髓间充质干细胞归巢水平明显增加(P=0.0043),CXCR4蛋白表达水平升高(P=0.036);④与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢凋亡细胞明显减少,Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高;与干细胞组相比,联合组Bax表达水平明显降低(P=0.0284),Bcl-2表达水平明显升高(P=0.0364);⑤结果显示,电针能促进骨髓间充质干细胞归巢,并增强骨髓间充质干细胞的抗凋亡作用。

人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

背景:人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞移植于1型糖尿病鼠体内,会使血糖降低,糖尿病症状有所改善,但腹腔移植的方式少有报道。目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病小鼠的治疗效果。方法:选采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,然后将其定向分化为胰岛样细胞。从15只雄性C57BL/6J小鼠中随机取3只小鼠做正常组,其余12只小鼠腹腔注射链脲佐菌素制备1型糖尿病模型。造模成功9只小鼠随机分为糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组,每组3只。造模10 d后,正常组和糖尿病组不予处理,尾静脉-胰岛样细胞组经尾静脉注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×10^5个细胞),腹腔-胰岛样细胞组经腹腔注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×10^5个细胞)。移植后每周检测2次血糖,移植后28 d进行葡萄糖耐量实验,移植后42 d检测胰岛素水平。结果与结论:①与糖尿组相比,尾静脉-胰岛样细胞组在移植后第10天开始血糖明显下降,一直维持到31 d,胰岛素水平升高,葡萄糖耐量改善,差异有显著性意义(P<0.05);腹腔-胰岛样细胞组血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量未见明显改善;②结果提示,应用人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞治疗1型糖尿病鼠,尾静脉注射是一种比较理想的移植方式,腹腔注射的效果不佳。

琼脂糖/明胶/透明质酸/细胞外基质水凝胶的制备与性能表征

背景:由于软骨组织无血管结构,无神经组织,缺乏自我修复与再生的内在能力,因此临床上软骨损伤的修复仍然是一个重大挑战。目的:旨在制备一种温敏性可注射生物活性水凝胶,用于软骨组织工程。方法:将0.4%琼脂糖、10%明胶和10 g/L透明质酸溶液混合,制备琼脂糖/明胶/透明质酸水凝胶,然后向其内分别加入0,10,20,30 g/L的软骨细胞外基质,制备4种温敏性可注射生物活性水凝胶,进行扫描电镜、透射电镜、平衡溶胀率、生物力学强度和体外降解率检测。将含20 g/L软骨细胞外基质的温敏性可注射生物活性水凝胶与软骨细胞-骨髓间充质干细胞共培养,培养1,3,7 d,通过活/死细胞荧光双染法评价该水凝胶的细胞相容性。结果与结论:①扫描电镜显示,4种水凝胶均具有良好的三维网格结构,孔径较大;透射电镜显示,细胞外基质颗粒均匀分布于水凝胶中,颗粒粒径主要在50-200 nm;②随着加入细胞外基质颗粒质量浓度的增加,水凝胶的平衡溶胀率降低;③浸泡于PBS溶液4周时,含0,10,20,30 g/L细胞外基质水凝胶的体外降解率分别为42.32%,67.36%,89.05%和99.47%;④当添加细胞外基质颗粒质量浓度在0-20 g/L时,水凝胶的生物力学强度逐渐增加;⑤培养7 d内,软骨细胞-骨髓间充质干细胞在水凝胶内均匀地分布与生长,并不断增殖,细胞存活率均在90%以上;⑥结果表明细胞外基质颗粒修饰的琼脂糖/明胶/透明质酸水凝胶,是一种可用于软骨组织工程的良好医用生物材料。

人脐带间充质干细胞及其外泌因子对白消安致雄性小鼠生殖损伤的保护作用

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)及其外泌因子对白消安(busulfan,BSF)致雄性小鼠生殖损伤的保护作用。方法将HUMSCs无血清培养48 h获得条件培养基(conditioned medium,CM),超滤浓缩为原培养基25倍。将BSF(40 mg/kg)通过腹腔注射小鼠,处理后第2天,将浓缩后的条件培养基注射至小鼠尾静脉,同时设对照组(生理盐水)、BSF组和HUMSCs组,治疗频次为每周2次,连续4周。取小鼠一侧睾丸,苏木素-伊红染色观察切片组织生精小管基底膜细胞分离情况和基底腔空泡形成情况;实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠生精细胞减数分裂相关基因mRNA的表达水平;Western blot分析小鼠睾丸组织中细胞黏附相关蛋白的表达水平。结果与其他组相比,HUMSCs-CM组小鼠睾丸损伤延迟,包括生精上皮基底膜细胞形成空泡和基底膜细胞脱离;HUMSCs-CM组小鼠生精细胞减数分裂基因STRA8、TNP2、SCP3 mRNA表达水平显著增加(P<0.05),小鼠睾丸组织中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和P-钙黏蛋白(P-cadherin)表达水平显著增加(P<0.05)。结论HUMSCs外泌因子通过减少生精细胞凋亡和增强细胞间的黏附作用保护BSF致精子发生的损害,上调黏附分子的表达。