免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌

目的筛选结核分枝杆菌(MTB)免疫磁珠荧光量子点检测方法的最佳配体组合。方法将本室筛选获得的MTB结合肽H8和商业化抗MTB多克隆抗体(Pab)与纳米磁珠偶联,多肽H8、商业化抗MTB单克隆抗体(Mab)和抗热休克蛋白65单克隆抗体(Mabc)与荧光量子点偶联,分别获得2种免疫磁珠和三种功能化荧光量子点,两两组合用于MTB检测,通过显微镜下观察荧光信号以及激光诱导荧光仪测量荧光值,判断不同配体组合与MTB的亲和性及特异性,获得最佳组合及其检测下限。结果偶联Mabc的荧光量子点与免疫磁珠MNP-Pab组合检测MTB结果为阴性,其余5组均为阳性。测量荧光值,检测效果较好的两组组合分别是MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8,阳性荧光值与阴性对照组比值分别是4.394和3.956,检测下限均是102条菌/mL。6组组合与12种非结核分枝杆菌(NTM)的亲和性各异,而与3种非分枝杆菌均不结合。结论 MNP-Pab+QD-H8和MNP-H8+QD-H8两组检测效果较好,与MTB亲和性较高,特异性较好,可作为MTB免疫磁珠荧光量子点检测技术的最佳配体组合。

免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌的方法学研究和初步评估

目的建立免疫磁珠荧光量子点技术检测MTB的方法，探讨最佳检测条件并进行初步评估。方法以MTB标准株H37Rv、12种非结核分枝杆菌（NTM）标准株及3种非分枝杆菌为检测对象，免疫磁珠和功能化荧光量子点作用为对照组。利用湿化学方法制备纳米磁珠和荧光量子点，分别与MTB结合肽H8偶联，获得同时与H37Rv作用的免疫磁珠和功能化荧光量子点，形成三元复合物结构，通过测量荧光值及荧光显微镜观察判定样品中是否存在MTB，建立纳米技术检测MTB的新方法，进一步探讨免疫磁珠和功能化荧光量子点的最佳检测浓度及作用时间。利用菌悬液和模拟痰标本，对该检测方法的检测下限和特异度进行初步评估。结果偶联的免疫磁珠和功能化荧光量子点均能与H37Rv结合，镜下可见其与H37Rv作用的三元复合物，实验组与对照组的荧光值比值约为4：1；免疫磁珠和功能化荧光量子点最佳检测浓度均为100mg／L，最佳作用时间为2h；H37Rv菌悬液和模拟痰标本检测下限均为10。CFU／ml；特异度检测结果，3种非分枝杆菌在显微镜下均未见红色荧光，荧光值小于对照组，为阴性；12种NTM菌悬液和模拟痰标本检测时，仅副偶发分枝杆菌、金色分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和偶发分枝杆菌在显微镜下可见红色荧光，荧光值与对照组的比值均〉2，判断为阳性，其余均为阴性。结论免疫磁珠荧光量子点技术检测技术有可能成为检测MTB的新方法，但其临床应用价值尚有待进一步评估。

噬菌体展示技术在病原体血清学检测中的应用研究进展

噬菌体展示技术广泛应用于临床治疗、诊断和科研等诸多领域并在病原体血清学检测新方法的研究方面显示出明显优势。利用该技术研究者可以在短期内筛选获得具有检测及诊断价值的抗原表位、特异性的结合肽以及重组抗体分子,彻底改变了抗体制备的传统途径,使得大量制备多样化的重组抗体分子成为可能。掌握噬菌体展示技术在病原体血清学检测中的特点,为该技术在筛选目标靶分子的血清学检测中寻求新的突破。