草莓生物技术研究进展

草莓的生物技术研究始于 6 0年代 ,但进展缓慢 ,进入 2 0世纪 90年代 ,取得了突破性进展 ,草莓的生物技术研究包括花药培养、茎尖培养、叶片和匍匐茎培养和遗传转化。

高粱胞质雄性不育及保持系的RAPD技术优化

以高粱细胞质雄性不育系和保持系 A1Tx6 2 3 A/B,A2 V4 A/B为材料 ,考察了 Mg2 + ,Taq酶 ,d NTP,引物 ,模板等的用量、循环参数及不同的 PCR仪对随机扩增多态性 DNA(RAPD)反应的影响。结果发现 :在 2 5 μL体系中 ,Mg Cl2 2 .0 mmol/L,Taq酶 0 .75 U(1 U=1 μmol/min) ,d NTP0 .1 5mmol/L,引物 1 6 .5 ng,模板 3 0 ng,明胶 0 .0 0 1 % ,KCl5 0 mmol/L,Tris1 0 mmol/L(p H8.3 )为最佳反应混合物组合。对 Peltier Thermal Cycler 2 0 0而言 ,94℃预变性 5 min,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,最后 72℃保温 5 min,共计 40个循环为最佳扩增条件 ;对 Perkin ElmerCetus DNA Thermal Cycler- 480而言 ,采用 94℃预变性 3 min后 ,前 3个循环 ,94℃变性 1 min,3 5℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,后 3 7个循环 ,94℃变性 3 0 s,3 6℃退火 45 s,72℃延伸 1 min,最后72℃保温 5 min的循环程序可获得理想扩增。并阐述了优化 RAPD实验体系的设计原则。

复合硫杆菌对污泥重金属生物淋滤机制的影响

对污泥生物淋滤过程中各种重金属元素的形态变化情况进行了测定,借助重金属化学形态转化规律,间接判断污泥重金属生物淋滤的转化机制。试验结果显示,Cu、Ni、Cd的生物淋滤是以直接机制为主的,Zn的生物淋滤过程是以间接机制为主的,Cr、Pb的生物淋滤过程属于混合机制,但其混合机理是有差别的。

纳豆菌的定向筛选及其生物学特征分析

目的从日本成品纳豆中筛选蛋白酶活性高、溶血栓活性显著的纳豆菌,并对筛选获得的菌株进行生物学特征分析。方法用梯度稀释法分离单菌落,然后根据所筛选菌株具有革兰氏染色阳性、淀粉酶活性、高蛋白酶活性、高纤溶酶活性等特征设计纳豆菌株的定向筛选方案。结果获得2株高蛋白酶活性、高纤溶酶活性的纳豆菌BN9和BN23;BN9液体培养物在接种后12 h进入对数生长期,24 h时菌体浓度和蛋白酶活性均达到最高,且生长延滞期的菌体呈长链状结构,对数生长期后期的菌体开始断裂为短杆状。结论采用定向筛选方案获得高溶血栓活性纳豆菌株的方法可行。

转基因杨树的研究及其生物安全评价

杨树基因组测序的完成使杨树成为研究林木分子生物学最重要的模式植物,为杨树基因工程的发展提出了巨大的机遇与挑战。本文简要介绍了世界转基因作物的发展状况以及安全性评估,重点从杨树抗虫、抗逆及改善材质的基因工程等方面综述了杨树基因工程的发展及其相关安全评价,指出对转基因杨树的安全评价应遵循有关转基因法规结合自身特点进行,重点考察其生态风险。本文针对杨树基因工程发展中存在的问题,提出应积极开发具有我国自主知识产权的新型基因,发展转基因新方法,推进我国杨树基因工程的健康发展。

扩增未知序列DNA片段的PCR技术研究进展

198 5年 ,Mullis等人发明了PCR技术 ,短短十余年间 ,这一技术得到迅速发展和应用 ,已由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。

大豆生物工程研究进展

90年代以来 ,大豆的生物工程研究重点放在建立遗传转化和再生体系上 ,随着遗传转化和再生技术的发展 ,我国已获得了抗病、抗虫转基因大豆植株 ,取得突破性进展。目前 ,大豆遗传转化主要采用农杆菌介导法、花粉管通法、基因枪及 PEG法。农杆菌介导的遗传转化是以大豆子叶、胚轴为外植体 ,通过卡那霉素筛选 ,器官发生再生转化植株 ;花粉管介导法是以植株整体为受体导入外源基因 ,获得稳定遗传品系 ;基因枪介导的遗传转化是以大豆幼胚的胚轴、用基因枪轰击生长点 ,可以从任意一个基因型获得转基因植株 ;PEG介导的遗传转化是将质粒导入大豆原生质体 ,通过潮霉素进行筛选 。

西瓜高效组织培养技术体系研究

西瓜离体组织培养技术是植株再生与转基因研究的重要基础。试验对西瓜离体组织培养技术进行了系统研究,结果表明:在W1培养基中添加浓度3～7mg/L的BA和0.5mg/L的IAA诱导营养胚分化的效果最佳,并且适合于所选试验材料的各个品系;W2培养基中KT的浓度以0.3mg/L为宜。选用贮藏1～2年的种子进行成熟子叶诱导营养胚芽丛分化,不仅所需培养时间短,而且芽丛分化率及成苗率高。

西瓜生殖细胞原位转化技术研究初报

利用西瓜有性生殖过程,将常规提纯的质粒DNA稀释后,涂抹在授粉后的柱头上,使其随花粉管伸入胚珠过程中形成的通道进入到生殖细胞,形成的合子胚在适宜的发育条件下,在植株原位发育成熟,从而得到转化种子。

西瓜嫁接换根栽培技术及效益评价

本文通过对西瓜嫁接换根及小拱棚双覆盖直播栽培技术成本投入和收益的分析结果表明 ,西瓜嫁接换根栽培技术是降低物化成本投入、提高投资成本收益和劳动生产率、增加瓜农种植收益最经济有效的技术措施。

高粱基因组DNA胞嘧啶甲基化在杂交种和亲本间差异研究

DNA甲基化在真核生物的生长发育过程中起着重要的调控作用。本研究用改良AFLP方法（MSAP）分析了3个高粱杂交种及其相应亲本总DNA 5＇-CCCG位点胞嘧啶的甲基化水平和杂交种与相应亲本的甲基化差异模式。研究发现，以V4A、1383、Tx622A和晋粱5号为亲本，3个杂交组合V4A×1383、Tx622A×晋粱5号和V4A×晋粱5号，F1的甲基化敏感扩增多态性比率即扩增的总甲基化位点数占总扩增位点数的比率分别为48．7％、47．6％和41．8％，都低于双亲。全甲基化（双链CmCGG）率分别为27．7％、25．4％和28．0％，也均低于双亲值，表明杂交种比相应的亲本在形成杂合体时某些位点发生了去甲基化。高粱4个亲本的甲基化敏感扩增多态性比率为51．4％～63．0％，全甲基化率为28．3％～29．1％。杂交种与其相应亲本比较，有4种类型的变化。A型，F1与其亲本甲基化模式相同；B型，去甲基化，双亲或亲本之一甲基化，但在F1该位点无甲基化；C型，超甲基化，F1甲基化程度高于双亲；D型，次甲基化，F1甲基化程度低于双亲。杂交种F1代DNA甲基化模式经历了较大的改变与调整，以协调来源于双亲的异质基因的协同表达，使某些基因高效转录，而有些基因转录受到抑制。杂交种F1代的甲基化水平低于双亲，是由于F1代相对于其亲本甲基化模式经过重新调整，在其基因组中甲基化水平发生了总体变化。杂种优势的产生与杂交种F1代基因组DNA甲基化模式的改变和重新调整有关。

玉米花粉和花丝生活力研究

将离体玉米花粉在不同温度条件下储存一定时间后,用于田间授粉,通过计算其结实率,研究离体玉米花粉在不同温度条件下生活力保持时间的长短。结果表明,低温可显著地延长离体玉米花粉的生活力,离体玉米花粉生活力保持在90%以上的储存期限是:24℃保存8h,4℃保存32h,-20℃保存56h。给吐丝后不同天数的果穗授粉,通过计算其结实率,研究玉米花丝生活力的保持时间和变化趋势。结果表明,吐丝后的1～6d,玉米花丝的生活力最旺盛,结实率可达95%以上。

A_2型高粱细胞质雄性不育系与其保持系的胞质DNA和核DNA差异

以高粱细胞质雄性不育系A2 V4 (A)及其保持系V4 (B)的总DNA为模板 ,对 184个随机引物进行筛选 ,找到6个其RAPD扩增产物在A/B间存在稳定差异的引物 .将该 6个引物同时扩增A/B的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)及叶绿体DNA(cpDNA) .以总DNA为模板时得到 12个扩增片段 ,以mtDNA为模板时得到 4个 ,以cpDNA为模板时得到 11个 .结果分析表明 ,在这些扩增片段中 ,有 7个仅仅出现在以胞质DNA为模板的扩增中 ,有 5个在以总DNA和胞质DNA为模板时同时出现 ,即认为这 12个片段来自胞质DNA .另有 7个片段 ,在以胞质DNA为模板时未出现 ,而是仅仅出现在以总DNA为模板的扩增中 ,认为是来自核DNA .来自核DNA的 7个扩增片段中 ,有 5个来自保持系 ,有 2个来自不育系 ,这表明 ,不育系与保持系在核DNA上存在差异 .对A/B核DNA在CMS中的重要性及研究对策进行了讨论 .图 2表 4参

大豆内生芽孢杆菌的分离和促生菌株的筛选及鉴定

分离筛选具有促生作用的大豆内生芽孢杆菌,以期获得能够促进作物生长的微生物资源。从不同产地不同品种的大豆种子中分离到40株内生芽孢杆菌。发芽试验中,菌株发酵液浸种处理大豆种子,大部分菌株表现出促进生长作用。其中促生作用最好的SN10E1菌株使豆芽长度增长41%,百株鲜重增长28%。从形态、生理生化反应以及16SrDNA序列比对等方面分析,最终确定SN10E1菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)。综合比较,确定SN10E1菌株具有促生作用,可以进行下一步研究。

玉米杂交种及其亲本基因组胞嘧啶甲基化水平研究

摘要：基因组DNA甲基化对基因表达起着重要的调控作用。本研究采用MSAP方法，对2个玉米杂交种及其相应亲本DNA 5'-CCG G位点胞嘧啶的甲基化水平进行分析，比较了2个玉米杂交种与其相应亲本的甲基化类型与差异。研究发现，2个玉米杂交种Mo17×Suwan 5和Suwan 1×太3221的F1代的甲基化敏感扩增多态性(MASP)比率分别为39．1％和40．1％，均略低于其相应的双亲(39．8％和39．7％、44．6％和43．2％)。2个杂交种的全甲基化(双链CmCGG)率分别为24．4％和23．3％，而其相应亲本Mo17、Suwan 5、Suwan 1和太3221分别为17．1％，24．4％、24．6％和21．6％。4个玉米亲本的MASP比率变化范围为39．7％-44．6％，平均为41．8％。全甲基化比率为17．1％-24．6％，平均为21．9％。杂交种与其相应亲本比较有4种类型的变化：A型，F1与其亲本甲基化横式相同；B型，去甲基化1C型，超甲基化；D型，次甲基化。杂交种F1代DNA的甲基化模式与其双亲比较，发生了较大的改变与调整。F1代基因组的杂合性与基因组DNA甲基化模式的重新调整有关。

玉米种子老化过程中EST同工酶变化与染色体畸变的研究

对玉米自交系Mo17种子分别进行 5 8℃热水和 4 5℃恒温老化处理并对种子老化过程中种子发芽率、EST同工酶酶谱变化与染色体畸变规律进行了研究。结果显示 :Mo17玉米种子萌发一天的种子胚EST酶谱共表现为 14条清晰条带 ,5 8℃热水处理 30min后 ,有四条酶带 (Rf值为 0 4 4、0 4 7、0 77、0 80 )消失 ,酶带号为 1、2、6、7、9的五条酶带着色变浅 ,由一、二级酶带变为二、三级酶带。 4 5℃恒温老化处理 6 0d后 ,Mo17种子EST酶谱中编号为 2和 5的两条酶带 (Rf值为 0 33、0 39)消失。处理 70d后 ,种子发芽率降至 39% ,酶带号为 11、12、13、14的四条酶带消失。随着老化时间延长 ,老化程度不断加重 ,发芽率低的玉米种子其根尖染色体畸变率相对较高 ,单桥、双桥、断片、落后及其它染色体畸变类型均被观察到。 5 8℃热水老化其发芽率降至 5 %时 ,染色体畸变率上升为 12 2 2 %。

苹果化学疏花疏果研究进展

根据文献报道对苹果的化学疏花疏果研究及其应用情况进行了综述和分析。苹果化学疏花疏果从1930年开始研究以来,发现20余种化学药剂有疏花疏果作用,其中实际应用最广泛的有西维因、NAA、石硫合剂,西维因和NAA用于疏果,石硫合剂用于疏花。但由于这些疏花疏果剂及其应用效果都存在一定缺点,近年来各国研究工作者致力于研究和寻找无公害的疏花疏果剂。影响化学疏花疏果的因子基本明确,有关研究报道比较一致。对化学疏花疏果剂的作用机理研究结果不一,尚存在分歧。

一个调控葡萄花和果实色素形成的基因家族——MYB相关基因家族

葡萄浆果的颜色是由花色素苷的量来决定的,UFGT控制花色素苷的合成,Myb相关基因通过时空表达调节UFGT,从而使花色素苷在葡萄发育的不同阶段和不同部位表达。不同葡萄品种调节花色素苷的合成的强度和模式的差异造成了有色葡萄品种的果皮有多种颜色,白色葡萄品种果皮是由于没有花色素苷的合成。Myb相关基因家族主要有八个成员,其中MybA的三个种类VlmybA1-1,VlmybA1-2和VlmybA2以及MybB的两个种类VlmybB1-1和VlmybB1-2得到了较深入的研究。

硝酸银在油菜基因转化中的影响作用

以芥菜型油菜DB3的下胚轴和子叶为外植体研究了不同浓度的AgNO3在油菜转化体系中的作用。结果表明AgNO3对于油菜下胚轴和子叶芽的分化是必须的 ,但是当AgNO3浓度超过某一临界值时又抑制愈伤组织的形成和外植体芽的分化。结果还发现未被农杆菌处理的外植体芽的分化所需的AgNO3最适宜的浓度为 2 0 μmol/L ,而被农杆菌处理过的外植体其分化所需的最适宜浓度增加为 30 μmol/L。