肌动蛋白相关蛋白2调控人抗原R稳定性对非小细胞肺癌细胞放疗抵抗的影响

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白2(ARPC2)通过人抗原R(HuR)对肺癌细胞放疗抵抗的影响.方法 将肺癌细胞根据不同处理,分为7组,ARPC2过表达组(使用ARPC2过表达慢病毒感染肺癌细胞)、ARPC2敲低组(使用shARPC2敲低慢病毒感染肺癌细胞)、HuR过表达组(使用HuR过表达慢病毒感染肺癌细胞)、HuR敲低组(使用shHuR敲低慢病毒感染肺癌细胞)、ARPC2过表达的同时HuR敲低组(同时使用ARPC2过表达和shHuR敲低慢病毒感染肺癌细胞)、ARPC2敲低的同时HuR过表达组(同时使用shHuR敲低和HuR过表达慢病毒感染肺癌细胞)、对照组(使用空载体慢病毒感染肺癌细胞).6 Gy的电离辐射处理后,流式细胞术检测各组肺癌细胞(A549、Calu-1、HCC827、MSTO-211H、NCI-H1299、NCI-H520、SK-MES-1)的凋亡水平.免疫印迹法检测肺癌细胞中HuR的蛋白表达水平.通过凋亡水平指示肺癌细胞的放疗抵抗.通过HuR的表达水平的半衰期以指示HuR的稳定性.比较用非配对双尾t检验,多组间比较则采用方差分析.结果 A549(0.43±0.08、1.88±0.15)、Calu-1(0.38±0.05、1.90±0.14)、HCC827(0.37±0.07、1.89±0.23)、MSTO-211H(0.39±0.06、1.95±0.29)、NCI-H1299(0.40±0.07、1.92±0.32)、NCI-H520(0.42±0.10、1.85±0.30)、SK-MES-1(0.44±0.09、1.90±0.33)中 ARPC2 的 mRNA 和蛋白表达水平高于人正常肺细胞 BEAS-2(0.12±0.03、1.19±0.19)、BNHLF(0.08±0.02、1.16±0.20,t=11.473、14.100、13.825、15.627、18.364、20.594、24.504、9.107、10.335、9.634、11.910、10.882、9.027、10.658,P<0.05).电离辐射处理组中 ARPC2 的蛋白表达水平(0.81±0.15、1.25±0.25、0.63±0.12,0.51±0.10、0.64±0.15、1.86±0.30、0.85±0.14)高于未处理组(0.17±0.04、0.15±0.04、0.16±0.04,0.17±0.05、0.16±0.04、0.17±0.05、0.18±0.06,t=13.037、21.035、13.610、7.331、9.925、28.567、14.814,P<0.05).电离辐射处理后ARPC2过表达组肺癌细胞的凋亡[(16.48±6.11)%、(16.03±5.35)%、(18.28±8.22)%、(24.70±9.71)%、(17.68±9.11%)]低于对照组[(47.92±6.58)%、(55.31±6.94)%、(51.29±7.16)%、(51.96±9.17)%、(54.16±2.24)%,t=11.071、14.183、9.579、6.453、12.311,P<0.05],ARPC2 敲低组肺癌细胞的凋亡[(70.47±8.46)%、(84.16±0.73)%、(76.71±1.87)%、(76.05±0.47)%、(88.07±9.14)%]高于对照组[(55.21±6.29)%、(51.59±7.04)%、(50.07±5.33)%、(47.14±7.53)%、(44.41±9.38)%,t=4.584、14.550、14.912、12.124、10.543,P<0.05].ARPC2 过表达组中 HuR、p-HuR、JAK1、p-STAT3 的蛋白表达水平(0.81±0.11、0.92±0.14、0.55±0.10、0.63±0.12)高于对照组(0.15±0.03、0.14±0.04、0.15±0.03、0.16±0.05,t=18.305、22.614、8.391、11.287,P<0.05),ARPC2 敲低组中 HuR、p-HuR、JAK1、p-STAT3 的蛋白表达水平(0.19±0.05、0.15±0.04、0.14±0.03、0.17±0.05)低于对照组(0.90±0.15、0.85±0.13、0.63±0.12、0.71±0.14,t=14.200、15.628、11.307、13.462,P<0.05).ARPC2 过表达组[(11.32±0.26)、(10.17±0.22)、(10.49±0.21)、(10.17±0.03)、(10.53±0.06)h]相较对照组 HuR 半衰期[(5.61±1.31)、(5.30±2.53)、(5.72±1.95)、(5.34±0.70)、(5.86±1.09)h]延长(t=13.523、6.056、7.691、21.819、13.533,P<0.05),ARPC2 敲低组[(2.02±0.71)、(2.96±1.23)、(2.61±0.68)、(3.04±0.82)、(2.23±0.22)h]相较于对照组 HuR 半衰期[(4.92±1.69)、(5.05±0.45)、(5.38±0.56)、(5.64±0.21)、(4.62±0.37)h]缩短(t=5.012、5.047、9.941、9.714、17.558,P<0.05).电离辐射处理后,HuR 过表达组(23.01±3.83、17.30±6.59、21.10±4.58、16.44±9.04、23.36±4.56)比对照组(47.30±6.59、51.10±4.58、46.44±9.00、53.36±9.56、45.97±2.54)可抑制肺癌细胞的凋亡(t=10.077、13.322、7.935、8.869、13.716,P<0.05),HuR 敲低组(80.90±17.46、72.24±10.84、77.82±18.9、84.16±10.98、83.50±11.54)比对照组能促进肺癌细胞的凋亡(t=5.693、4.918、5.163、6.025、5.925,P<0.05).结论 ARPC2通过提高HuR的蛋白稳定性促进了肺癌细胞的放疗抵抗.