结直肠癌患者血液循环中癌细胞微转移的观察

目的观察结直肠癌患者手术时癌细胞微转移情况。方法以K19 mRNA及癌胚抗原(CEA) mRNA为标志物,取门静脉血与周围血做反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测。结果K19 mRNA以及CEA mRNA两者的阳性率大致相符,而且与临床分期、病理细胞分化情况相关(P<0.05)。经过2年的随访,阳性、可疑及阴性组三者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论对结直肠癌患者血液循环中K19以及CEA两种标志物的检测,具有提示临床情况的意义,并且与患者预后有关。可用于对术后患者的定时复查,以使医师及早做出进一步的治疗计划或及时调整现有治疗计划。

在癌基因研究中应用巢式RT-PCR

目的 讨论癌基因研究中应用巢式反转录聚合酶链反应 (巢式RT PCR)对目的基因进行扩增的应用体会。方法 以巢式RT PCR法检测 5 5例大肠癌患者门静脉血和 5 4例卵巢癌患者及 10例妇科良性肿瘤病人骨髓中细胞角化蛋白基因 19(CK 19)mRNA的表达 ,并对实验方法进行了改良和优化。结果 大肠癌中有 5 4.5 % (30 /5 5 )检得CK 19阳性 ,卵巢癌中有6 3 .0 % (34/5 4)检得CK 19阳性 ,10例妇科良性肿瘤无CK 19的表达。我们认为 ,为了能够在实验中得到好的扩增效果 ,整个RT -PCR操作中应把握以下几点 :①要对用商品化试剂盒抽提到的总RNA样品在冷环境下重新沉淀、纯化 ;②在对反转录反应的温度控制方面 ,要注意高低温转换迅速彻底这一原则 ;③巢式引物的应用 ,能够使整个实验的特异性大为增高。结论 经过上述三方面措施改良后的巢式RT -PCR能够用来检测恶性肿瘤患者CK - 19mRNA的表达 ,因而成为监测这类肿瘤患者造血及血液循环系中癌细胞分布情况的一种有效的分子生物学手段。

用三种生物标志物对大肠癌进行检测的意义

目的寻找一种切实可行的检测肿瘤的生物标志物及其方法。方法对100例结直肠癌患者取血清,另取献血员19例,非肿瘤患者13例为对照;并另取癌组织13份,癌旁组织11份作对比观察,同时用三种方法进行检测。一为对p16基因甲基化分析;二为对其进行缺失分析,三为对其进行点突变的分析。结果患者血清异常甲基化为58%;缺失为14%;点突变为25%;癌组织之结果与血清相似;而癌旁组织显然较低。SSCP阳性者经序列分析证实有3例为错义突变,1例为移位,1例为同义突变。其中4例造成p16蛋白的缺失。作为肿瘤的生物标志物,三项联合应用其灵敏度为75%,特异性为96.87%,准确率为80.30%。比文献用CEA+CA19-9+CA72-4+CA242四项指标联合之灵敏度、特异性、准确率皆高,尤其是特异性。如果仅用甲基化加突变亦与之相当。结论血清DNA含量不高但能反映人体对肿瘤的负荷,实验对DNA的质和量的要求不是太高,能检出10-3的DNA片段,可用于临床诊断及大面积普查,并可用于对出院患者的长期随访。

核仁形成区嗜银蛋白与非霍奇金淋巴瘤白血病的关系

目的进一步探讨非霍奇金淋巴瘤白血病(NHL-L)与核仁区嗜银蛋白(AgNORs)变化的关系.方法用银染技术检测了NHL患者49例.并用急粒细胞性白血病(AML)21例、慢粒细胞性白血病(CML)19例、非恶性血液病15例作为对照.结果三种白血病之AgNORs分别与正常对照相比差异均有统计学意义(P＜0.01).NHL-L与AML或CML相比差异具有统计学意义.临床1～2期NHL伴白血病(NHL-L1-2)、3～4期(NHL-L3-4)两组分别与NHL相比差异具有统计学意义(P＜0.01).随着病情进展,从NHL-L1到NHL-L2其AgNORs有随之上升趋势.结论 AgNORs在NHL-L的预后判断上可能是一个很有用的生物指标,还可用作疗效指标以及监倥病情的复发.

结直肠癌患者血清中CDKN2／p16基因异常的观察

近年来研究表明，肿瘤DNA存在于患者周围血液中，虽含量极微却反映人体负荷肿瘤，CDKN2／p16基因是肿瘤抑制基因家族中的重要一员，它的功能异常多见于恶性肿瘤。它的结构异常表现为缺失和点突变，以及其基因内含子5＇端、CPG岛的高度甲基化，抑制启动子区域使其失活。为了探讨在同一患者中这几种异常是否单独或相互起作用而设计此项研究。

结直肠癌患者血清中CDKN2/p16基因异常的检测

目的寻找一种切实可行的检测肿瘤的生物标志物及其方法。方法对100例结直肠癌患者取血清,取献血员19例,非肿瘤患者13例为对照;并另取癌组织26份,癌旁组织22份及非恶性组织29份作对比观察,进行p16基因甲基化分析;并进行基因缺失分析及点突变的分析。结果患者血清p16基因异常甲基化为69.00%;缺失率为9.00%;点突变率为45.00%。癌组织检测结果与血清相似。SSCP阳性者经序列分析证实有3例为错义突变,1例为移位,1例为同义突变。其中4例造成p16蛋白的缺失。作为肿瘤的生物标志物,3项联合应用其灵敏度为88.00%,特异性为96.87%,准确率为90.15%。比文献用CEA,CA19-9,CA72-4,CA242四项指标联合之灵敏度、特异性、准确率皆高。结论血清DNA含量不高但能反映人体对肿瘤的负荷,CDKN2/p16基因异常的检则,能检出10-3的DNA片段,可用于临床诊断及大面积普查,并可用于对出院患者的长期随访。提示p16基因异常甲基化在结直肠癌癌变机制中起决定性作用。

CDKN2/p16甲基化的研究与结直肠癌

抑癌基因C D K N2/p16在结直肠癌等多种肿瘤中缺失、点突变及甲基化,导致肿瘤的发生发展。甲基化是其失活的主要机制。应用甲基化特异PC R,检测恶性肿瘤患者外周血中的甲基化改变,在早期诊断、监测术后复发和判定预后方面,具有重要的临床意义。