优化高效液相色谱法测定棉籽粕中游离棉酚的含量

本试验旨在建立一种测定棉籽粕中游离棉酚含量的高效液相色谱(HPLC)法的优化方法。试验采用丙酮提取棉籽粕样品,经超声、离心、抽滤、旋转蒸发处理,用乙腈-0.2%磷酸(体积比为85∶15)溶液溶解;色谱条件为:色谱柱Agilent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸(体积比为85∶15)溶液,流速1.0mL/min,紫外检测波长235nm,进样量20μL,柱温25℃。结果得出,游离棉酚的回归标准曲线为y=189 347x+24 969(r=0.999 99),在游离棉酚含量为0.122 4～78.336μg/mL范围内线性良好,最低定量限为0.52mg/kg;棉籽粕样品36h内4℃稳定性的相对标准偏差在1.51%～3.43%;平均回收率在94.72%～99.49%,相对标准偏差在1.72%～3.13%。可知,本方法稳定性好,准确度、灵敏度和回收率高。