阿魏酸对U937细胞生长的抑制作用及其相关机制研究

目的:探讨阿魏酸(FA)对人急性髓系白血病(AML)细胞系U937细胞增殖、凋亡及Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:使用不同浓度的FA(0、10、25、50、100、200μmol/L)分别处理人AML细胞系Kasumi-1、HL-60、U937细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,计算各个细胞系的半数抑制浓度(IC_(50))。将U937细胞分为对照组、FA组(50μmol/L FA)、FA+pcDNA组(50μmol/L FA+转染空载质粒)、FA+pcDNA-TLR4组(50μmol/L FA+转染TLR4过表达质粒)。采用流式细胞术检测各组U937细胞周期与细胞凋亡;平板克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力;荧光定量PCR检测U937细胞TLR4、NF-κB p65 mRNA水平;蛋白印迹法检测U937细胞细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白E(CyclinE)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果:随着FA浓度的升高,Kasumi-1、HL-60、U937细胞存活率逐渐下降(r=-0.919,r=-0.909,r=-0.900),U937细胞的IC_(50)为50.25±2.23μmol/L。与对照组比较,经药物处理U937细胞后,FA组G_(0)/G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),细胞克隆形成数、S期和G_(2)/M期细胞比例、CyclinD1、CyclinE、Bcl-2蛋白及TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与FA组和FA+pcDNA组比较,FA+pcDNA-TLR4组G_(0)/G_(1)期细胞比例、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),细胞克隆形成数、S期和G_(2)/M期细胞比例、CyclinD1、CyclinE、Bcl-2蛋白及TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:FA通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制U937细胞增殖,促进细胞凋亡。