载脂蛋白C-Ⅲ基因沉默对HepG2细胞脂代谢的影响

目的:研究RNAi技术沉默载脂蛋白C-Ⅲ基因(ApoC3)表达后对HepG2细胞内外脂质含量及其他脂代谢相关基因表达的影响。方法:合成3对针对ApoC3mRNA不同位点序列的小干扰RNA(siRNA),并分组转染至人肝细胞株HepG2,实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测ApoC3mRNA及蛋白质的表达水平,筛选出沉默效果最佳的一对siRNA。将最有效的siRNA转染HepG2细胞,48h后测定细胞内外脂质含量以及脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果:25nmol/L siRNA和3μl/孔(24孔板)转染试剂的转染效率最高。ApoC3-siRNA-3对ApoC3基因的沉默效果最好,对mRNA的抑制率为94.6%,上清液中检测不到ApoC-Ⅲ。ApoC3-siRNA-3沉默ApoC3基因后细胞内三酰甘油(TG)和胆固醇含量显著高于对照组,细胞外TG含量显著低于对照组。与对照组比较,ApoC3-siRNA-3沉默组载脂蛋白B100基因mRNA表达水平显著增强,肝脂酶基因mRNA表达水平显著降低。结论:ApoC3基因沉默可显著升高HepG2细胞内TG含量及显著降低细胞外TG含量,其可能机制是通过减少极低密度脂蛋白(VLDL)颗粒的分泌以及增加VLDL残粒的摄取。