医学免疫学实验课程网络在线教学模式探索与研究

新冠肺炎疫情影响下,"停课不停学、停课不停教",促使教学团队对新形势下实验课程网络教学模式进行深入的探索和研究。这不仅是形势所趋,也是当代教育教学发展的需要。利用现代网络技术建构的实验教学模式应在尽可能符合学习认知规律的前提下丰富和多样化,通过声音、图形、影像等感官多维度刺激达到甚至超越传统教学模式的教育教学效果。教研组以医学免疫学实验网络教学为例对实验网络在线教学模式的各环节加以探索和研究,以期为完善实验网络在线教学模式奠定基础。

赶黄草活性成分槲皮素和没食子酸对CCl_(4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制

目的:探究赶黄草活性成分槲皮素和没食子酸对CCl_(4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法:将小鼠随机分为4组(每组10只):正常组、模型组、槲皮素组(100 mg/kg)和没食子酸组(100 mg/kg)。正常组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水,其余各组按分组给予相应药物灌胃7 d,末次灌胃后2 h,腹腔注射0.2%CCl_(4)植物油溶液(15 ml/kg),并16 h后收集小鼠血清和肝脏组织。HE染色观察小鼠肝脏病理变化;ELISA检测小鼠血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)水平;Western blot和免疫荧光检测肝脏中血红素加氧酶-1(HO-1)水平。结果:相比于模型组小鼠,槲皮素和没食子酸干预后,可降低其肝脏指数(P<0.05),降低血清ALT和TNF-α水平(P<0.01),增加肝组织中GSH水平(P<0.01),增加肝组织中HO-1表达。结论:赶黄草活性物质槲皮素和没食子酸对于肝脏损伤具有保护作用,其机制可能与增强抗氧化损伤能力,降低炎症因子水平有关。

庆大霉素通过调节大鼠慢性炎症控制高脂饮食对高血压的影响

目的探讨高脂喂食对大鼠内毒素、炎症因子和血压水平的影响及硫酸庆大霉素对其干预结果的观察。方法给予8周龄雄性SD大鼠适应性喂养1周后,分为对照组(普通饲料喂养)11只,高脂组(高脂饲料喂养)13只和庆大霉素组(高脂饲料喂养)13只,测得三组大鼠血压值作为基线水平,饲养4周,第5周开始每周监测大鼠血压,第9周开始,庆大霉素组给予硫酸庆大霉素灌胃干预,对照组和高脂组给予等量生理盐水灌胃。第13周结束,处死各组大鼠,检测大鼠血浆内毒素、IL-1β(白介素1β)浓度,检测大鼠血浆葡萄糖浓度、胰岛素浓度,用稳态模型评估胰岛素抵抗指数。结果实验初始收缩压对照组为(96.09±3.51)mmHg;高脂组为(93.28±4.12)mmHg;庆大霉素组为(92.30±6.26)mmHg,三组大鼠收缩压基线水平一致(P>0.05)。实验结束时高脂组大鼠收缩压(140.89±11.42)mmHg显著高于对照组(99.62±11.27)mmHg和庆大霉素组(94.64±9.59)mmHg,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组和庆大霉素组收缩压水平一致(P>0.05)。从实验初始至结束各组大鼠体质量每周行横向比较(P<0.05)。实验结束时庆大霉素组中的血浆内毒素浓度(0.10±0.02)EU/mL显著低于高脂组(0.14±0.02)EU/mL、显著高于对照组(0.07±0.01)EU/mL(P<0.05)。庆大霉素组中的IL-1β浓度(106.6±34.84)ng/mL显著低于高脂组(265.63±71.53)ng/mL(P<0.05),与对照组(90.90±26.67)ng/mL相比(P>0.05)。高脂组(1.24±0.19)mmol/L和庆大霉素组(1.27±0.30)mmol/l血浆总胆固醇水平均高于对照组(0.88±0.09)mmol/L(P<0.05),而高脂组和庆大霉素组胆固醇水平一致(P>0.05),庆大霉素组(0.43±0.13)mmol/L血浆低密度脂蛋白显著高于对照组(0.30±0.07)mmol/L(P<0.05)。庆大霉素组中的胰岛素抵抗(1.77±0.33)显著低于对照组(3.50±0.73)和高脂组(3.44±1.61)(P<0.05),而对照组和高脂组胰岛素抵抗水平一致(P>0.05)。结论高脂(高甘油三酯)喂食可导致大鼠收缩压升高、血浆内毒素和IL-1β水平增加,硫酸庆大霉素灌胃干预可能通过缓解机体低度炎症改善血压异常。高脂饲料喂养法建立的动物模型适合应用于建立单纯性高胆固醇血症,并不能建立肥胖大鼠模型。

EPEC粘附素IntiminC280抗血清的制备及其中和能力测定

目的制备EPEC粘附素IntiminC280抗血清,检测其中和EPEC对Hep-2细胞粘附作用。方法用基因克隆技术构建IntiminC280表达载体pET32(α)-intiminC280,转化表达宿主菌BL21,用IPTG诱导His-IntiminC280融合蛋白的表达,SDS-PAGE分析其表达形式;用NI柱亲和层析法纯化融合蛋白,并辅以佐剂免疫家兔,4次免疫后采血,分离血清,对流免疫电泳法检测抗血清效价;以该抗血清作为一抗,采用Western blot检测EPEC粘附素Intimin的表达;用不同稀释度的抗血清中和EPEC,显微镜下观察细菌被中和后对Hep-2细胞的粘附情况。结果成功构建BL21/pET32(α)-intiminC280原核表达系统,表达蛋白的分子质量单位为50ku,与预期相符。用纯化的His-IntiminC280免疫家兔获得高效价抗血清,16倍稀释后仍能有效抑制EPEC对Hep-2细胞的粘附。结论 IntiminC280抗血清具有抑制是EPEC粘附Hep-2细胞作用,可作为EPEC疫苗研发的备选抗原。

乙脑/寨卡嵌合病毒感染性克隆构建及病毒拯救

目的构建乙脑/寨卡嵌合病毒感染性克隆并拯救嵌合病毒。方法通过分子克隆技术将寨卡病毒prM/E基因克隆到乙脑病毒疫苗株SA-14-14-2感染性克隆的KasI和BglⅡ位点,构建乙脑/寨卡嵌合病毒感染性克隆,体外转录嵌合病毒RNA,再将RNA电转染BHK21细胞拯救病毒,并用免疫荧光技术、测序和噬斑试验进行鉴定,通过动物试验初步鉴定嵌合病毒的神经毒力。结果感染性克隆质粒可被相应限制性内切酶切下与理论值相吻合的核酸片段(1.1、0.7、0.4bp);拯救的病毒可在BHK21细胞形成噬斑,能被寨卡病毒抗血清识别;测序表明嵌合病毒含有寨卡病毒的prM/E基因。用嵌合病毒攻击小鼠,显示具有神经毒力,接种后14d小鼠全部死亡。结论成功拯救乙脑/寨卡嵌合病毒。该嵌合病毒对小鼠有较强的神经毒力,为寨卡病毒疫苗研发提供一种新的思路。

乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆的构建及病毒拯救

目的构建乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆并进行病毒拯救。方法分节段合成乙脑病毒野毒株SA14全长cDNA序列,采用分段连接方式构建SA14全长cDNA质粒,以其为模板体外转录RNA并电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑试验和间接免疫荧光法鉴定拯救病毒;绘病毒生长曲线,测定拯救病毒对小鼠的神经毒力。结果酶切鉴定质粒模板成功构建,用免疫荧光法检测到恢复病毒包膜蛋白表达,噬斑实验发现乙脑野毒株噬斑直径大于疫苗株;绘制病毒生长曲线,野毒株和疫苗株均在60h达到高峰。用拯救病毒进行动物感染试验,野毒株对小鼠脑内神经毒力LD50为10-1.07,皮下神经毒力LD50为100.33。结论成功建立乙脑野毒株SA14感染性克隆并拯救病毒,为进一步研究乙脑病毒的致病机制等奠定了基础。

致病性大肠埃希菌EspA抗血清制备及其对细菌粘附的影响

目的制备致病性大肠埃希菌(EPEC)分泌蛋白A(EspA)抗血清,并检测其对EPEC粘附的中和作用。方法以EPEC标准株E2348/69为模板,采用PCR方法获得EspA基因,将目的基因连接载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-EspA,转入表达菌株BL21后用IPTG诱导表达并采用Ni-柱亲和层析法纯化EspA;以纯化EspA辅以佐剂免疫家兔,多次免疫获得抗血清,采用中和试验检测抗血清中和EPEC粘附Hep-2细胞的能力。结果成功构建EspA原核表达质粒,表达蛋白分子质量单位为37ku,与预期值相符。用纯化的表达蛋白EspA免疫家兔,对流免疫电泳检测抗血清的效价为1∶2,但稀释度≤1∶16时仍能效抑制EPEC粘附Hep-2细胞。结论 EspA抗血清具有抑制EPEC粘附Hep-2细胞作用,有望为疫苗研发的候选抗原。

寨卡病毒病的诊疗和疫苗研究进展

寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）于1947年在乌干达寨卡森林恒河猴体内首次被分离，1954年在人体内分离到该病毒。2007年以前，ZIKV并未对人类健康造成重大威胁。近些年研究发现，孕妇感染ZIKV可能会引起新生儿小头畸形，而部分成人感染后可导致永久性神经系统后遗症（格林巴利综合征），WHO已将寨卡病毒病的流行列为国际关注的突发公共卫生事件。笔者从ZIKV感染的诊断、治疗以及病毒疫苗研发等方面的研究进展进行综述，现将结果阐述如下。