经血间充质干细胞外泌体对人卵巢癌细胞A2780生物学行为的影响

目的 探讨经血源性间充质干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,MenSCs)来源的外泌体(MenSCs-derived exosomes,MenSCs-Exos)对人卵巢癌细胞A2780增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期分布的影响和机制。方法 分离纯化MenSCs,流式细胞术鉴定其细胞表型,油红O染色观察其成脂分化能力;超速离心法分离MenSCs-Exos,电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析其大小及分布,蛋白免疫印迹法检测外泌体标志性蛋白分子CD9、TSG101、calnexin的表达。采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell细胞体外侵袭实验、流式细胞仪检测MenSCs-Exos对A2780细胞增殖、迁移、侵袭能力和细胞周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白和迁移相关蛋白的表达。结果 成功分离具有干细胞表型和成脂分化潜能的MenSCs,同时检测发现MenSCs-Exos为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡,粒径为30~150 nm,平均为72.89 nm,膜表面标志性蛋白CD9、TSG101表达呈阳性,calnexin表达呈阴性。与对照组相比,MenSCs-Exos能增强A2780细胞增殖、迁移和侵袭能力,影响其细胞周期分布,并且可上调β-catenin、c-Myc、TCF4、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。结论 MenSCs-Exos可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进A2780细胞增殖,并通过下调E-cadherin的表达促进A2780细胞的迁移和侵袭。

月经血源性间充质干细胞来源外泌体对SD大鼠皮肤创面愈合的促进作用及其机制

目的观察月经血源性间充质干细胞(MenSCs)中分离的外泌体(MenSC-Exos)对SD大鼠皮肤创面愈合的促进作用,并探讨其机制。方法分离培养健康成年女性志愿者的MenSCs,提取MenSC-Exos;将SD大鼠随机分为实验组和对照组,制作背部皮肤机械创面,分别给予MenSC-Exos或PBS治疗;观察创面愈合情况并计算创面愈合率,采用HE染色观察创面炎症细胞浸润情况,免疫荧光法检测M1、M2型巨噬细胞,采用免疫组化法检测创面组织中的白细胞介素(IL)-6、IL-10、新生血管、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白,采用Masson染色检测创面胶原蛋白含量及成熟度。培养成纤维细胞并分成外泌体组和PBS组,分别加入MenSC-Exos或PBS,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果实验组术后第7、14天创面愈合率、Ⅲ型胶原蛋白沉积率和胶原蛋白含量高于对照组,Ⅰ型胶原蛋白沉积率低于对照组(P均<0.05)。实验组术后第7天创面炎症细胞数量和M1/M2低于对照组,M2型巨噬细胞数量高于对照组(P均<0.05);与对照组相比,实验组术后第3、7天创面IL-6表达降低,IL-10表达及血管内皮细胞表达升高(P均<0.05)。外泌体组培养1~5 d细胞增殖能力均高于PBS组,外泌体组培养24 h细胞迁移率高于PBS组(P均<0.05)。结论MenSC-Exos能够促进大鼠皮肤创面愈合,机制可能与调节炎症反应、促进血管生成和成纤维细胞增殖、调节胶原重塑有关。

青蒿琥酯通过调节卵巢癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路诱导铁死亡

目的:探讨青蒿琥酯(ART)对人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV3和ES-2,分为对照组和ART处理组(使用10、20、40μmol/L ART处理)。采用CCK-8法、平板克隆法检测细胞增殖情况;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平变化;谷胱甘肽测定试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量变化;透射电镜观察ART作用后细胞超微结构变化;CCK-8法检测铁死亡小分子抑制剂对ART的逆转作用;Western blot检测Bcl-2、Bax、Wnt/β-catenin通路表达蛋白及GPX4蛋白的表达。结果:不同浓度ART均能显著抑制卵巢癌的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,且该作用呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组相比,ART处理组出现明显铁死亡特征,包括ROS水平增加(P<0.05),GSH水平下降(P<0.05)和电镜下细胞超微结构的变化,且铁死亡小分子抑制剂能逆转ART对卵巢癌细胞的铁死亡作用(P<0.05)。Western blot结果显示,ART处理后卵巢癌细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促进凋亡蛋白Bax表达显著上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、c-myc、Cyclin D1表达下调,铁死亡相关蛋白GPX4表达下调,且呈浓度剂量依赖性(P<0.05)。结论:ART可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,诱导卵巢癌细胞铁死亡。

LINC01088对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及机制

目的:探讨长基因间非编码RNA 1088(LINC01088)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭的调控作用及可能机制。方法:携带LINC01088序列的重组慢病毒感染SKOV3细胞作为实验组(LV-LINC01088组),携带无意义序列的重组慢病毒感染SKOV3细胞作为阴性对照组(LV-NC组),同时将未感染的SKOV3细胞设为空白对照组(Control组)。CCK-8法和划痕实验分别用于检测细胞的增殖和迁移能力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。Western blot法分析上皮间质转化(EMT)相关蛋白、PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白表达。结果:与Control组及LV-NC组比较,LV-LINC01088组SKOV3细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低,PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白p-Akt 473、p-PI3K表达降低(P均<0.05)。结论:过表达LINC01088可抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT,抑制PI3K/Akt信号转导通路可能是其作用机制。

毛萼乙素通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌细胞增殖的机制探讨

目的:探讨毛萼乙素(Eriocalyxin B,EriB)通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖的机制。方法:CCK-8、软琼脂克隆形成实验检测EriB对结直肠癌细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测EriB对结直肠癌细胞周期和凋亡的影响,无血清悬浮培养实验检测EriB对结直肠癌细胞干性的影响,Western blot检测周期、凋亡以及分子机制相关蛋白的表达变化,裸鼠皮下瘤实验体内检测EriB对结肠癌细胞生长增殖的影响,免疫组织化学染色检测小鼠皮下瘤组织Ki67的表达,SynergyFinder用于分析EriB对5-FU抗结直肠癌的协同作用。结果:与对照组相比,EriB处理显著抑制了结直肠癌细胞的存活(P<0.05或P<0.001),抑制干细胞球体数量(P<0.001)。流式细胞术检测结果表明,与对照组相比,EriB处理组S期和G2期细胞百分比增加(P<0.001),细胞凋亡增加(P<0.001)。Western blot结果显示,EriB处理细胞后,干性相关分子CD44、Sox2、Klf4表达下调,细胞周期相关蛋白CyclinA、Cdk2表达下调,凋亡相关蛋白ClPARP、Cl-caspase-3表达上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、CyclinD 1、c-myc表达下调。EriB与5-FU联合应用,经SynergyF inder分析,ZIP synergy得分大于+10,有协同作用。裸鼠异种移植瘤模型结果表明,与对照组相比,EriB处理显著抑制肿瘤生长,并减小裸鼠皮下异种移植瘤的体积(P<0.05)。免疫组织化学分析显示,EriB处理组显著降低了肿瘤组织中Ki67的表达。结论:EriB可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖。