利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究

构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用。构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/cmRNA的转录情况。随后用水动力学方法,向小鼠尾静脉注射pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型。采用此感染模型,将pHBV1.5与在体外实验筛选到有明显抑制作用的shRNA表达载体(psiHBV4)共注射,注射后第6天用同样方法检测其干扰效果。结果显示,成功构建了针对HBV前c/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5、psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC,筛选到在体外对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体;注射pHBV1.5的动物血清高表达HBsAg和HBeAg。而共注射干扰性psiHBV4明显抑制了HBeAg的表达,与单纯感染组相比有显著差异,RT-PCR显示肝内HBV C mRNA水平亦明显降低。上述结果表明,siRNA能特异抑制HBV的复制和表达,对乙型肝炎的治疗有潜在应用前景。

RNA干扰体内抑制HBeAg表达

目的在机体水平观察小干扰RNA(siRNA)对HBeAg表达的影响。方法通过尾静脉注射1.5倍的HBV真核表达质粒pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型,再将其与针对乙型肝炎病毒核心区的siRNA表达载体(psiHBV4)共注射,于注射后第6天取血测HBeAg的表达,并用RT-PCR检测肝组织HBV prec/c mRNA转录子的水平。结果注射后第6天血清中,HBsAg、HBeAg在造模组中高表达。psiHBV4干扰组中HBeAg的表达受到了明显的抑制,与对照组相比有显著差异(P<0.05),RT-PCR显示肝内HBV prec/c mRNA水平亦明显降低,而无关干扰对照组则无相应的干扰作用。结论RNAi能特异,高效的抑制小鼠体内HBeAg的表达,为乙型肝炎的治疗带来了新的希望。