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NF2/YAP信号通路通过FSP1诱导CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡
1
作者
蒲卢兰
李静佳
+4 位作者
陈宇
周瑜清
荣欣欣
侯令密
周方方
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2024年第4期206-211,共6页
目的研究NF2和YAP表达对CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响,探讨铁死亡的相关分子机制。方法培养CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞,通过台盼蓝染色(TBA)实验检测经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后细胞的...
目的研究NF2和YAP表达对CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响,探讨铁死亡的相关分子机制。方法培养CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞,通过台盼蓝染色(TBA)实验检测经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后细胞的死亡情况,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,分析细胞铁死亡水平。使用Western blot检测NF2和YAP在CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞中的蛋白表达情况,并用慢病毒分别进行敲除和过表达,观察细胞铁死亡水平,并采用实时定量RT-PCR和Western blot检测成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的表达变化。结果经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3分别处理后MDA-MB-231细胞死亡率增加,CD24^(low)细胞死亡率高于CD24^(high)细胞(t=14.548,P<0.001;t=8.310,P=0.001;t=8.600,P=0.001)。同时,TBA法结果显示,在含或不含半胱氨酸条件下,CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞的MDA含量差异有统计学意义(t=-3.920,P=0.017;t=11.566,P<0.001);与对照组(DMSO)相比,CD24^(high)和CD24^(low)细胞经铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后MDA水平增加,其中CD24^(low)细胞的MDA含量比CD24^(high)更高(t=10.763,P=0.006;t=24.067,P<0.001)。Western blot实验结果表明,NF2与YAP在CD24^(low)和CD24^(high)细胞的蛋白含量差异有统计学意义(t=-4.331,P=0.012;t=4.219,P=0.013),CD24^(low)细胞中YAP的蛋白表达更高(t=4.219,P=0.013),而CD24^(high)细胞中NF2的蛋白表达更高(t=-4.331,P=0.012)。在CD24^(high)MDA-MB-231细胞中构建NF2敲除或(和)YAP过表达细胞株,并用实时定量RT-PCR和Western blot检测,结果显示铁死亡关键蛋白FSP1在4组间的表达差异有统计学意义(F=30.297,P<0.001)。同时,检测NF2敲除或(和)YAP过表达后CD24^(high)MDA-MB-231细胞的铁死亡情况,结果表明敲除NF2或(和)过表达YAP后加入铁死亡诱导剂Erastin均可在一定程度上促进细胞死亡(F=38.911,P<0.050),其中在NF2敲除联合YAP过表达条件下,CD24^(high)MDA-MB-231细胞死亡率最高,而在Erastin的基础上添加铁死亡抑制剂Fer-1后细胞的死亡率下降,4组间比较差异无统计学意义(F=0.256,P=0.855)。结论在CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞中敲除NF2联合过表达YAP会抑制FSP1表达,促进细胞铁死亡。
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关键词
乳腺肿瘤
铁死亡
成纤维细胞特异蛋白1
NF2
YAP
原文传递
题名
NF2/YAP信号通路通过FSP1诱导CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡
1
作者
蒲卢兰
李静佳
陈宇
周瑜清
荣欣欣
侯令密
周方方
机构
川北
医学院
基础
医学
与法
医学院
川北医学院附属医院甲状腺乳腺外科/乳腺癌生物靶向实验室
出处
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2024年第4期206-211,共6页
基金
四川省科技厅自然科学基金面上项目(2022NSFSC0775)
四川省基层卫生事业发展研究中心资助项目(SWFZ22-C-82)
+1 种基金
南充市科技局市校科技战略合作项目(20SXQT0052)
川北医学院校级科研发展计划项目(CBY22-QNA11)。
文摘
目的研究NF2和YAP表达对CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响,探讨铁死亡的相关分子机制。方法培养CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞,通过台盼蓝染色(TBA)实验检测经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后细胞的死亡情况,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,分析细胞铁死亡水平。使用Western blot检测NF2和YAP在CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞中的蛋白表达情况,并用慢病毒分别进行敲除和过表达,观察细胞铁死亡水平,并采用实时定量RT-PCR和Western blot检测成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)的表达变化。结果经半胱氨酸饥饿、铁死亡诱导剂Erastin和RSL3分别处理后MDA-MB-231细胞死亡率增加,CD24^(low)细胞死亡率高于CD24^(high)细胞(t=14.548,P<0.001;t=8.310,P=0.001;t=8.600,P=0.001)。同时,TBA法结果显示,在含或不含半胱氨酸条件下,CD24^(high)和CD24^(low)MDA-MB-231细胞的MDA含量差异有统计学意义(t=-3.920,P=0.017;t=11.566,P<0.001);与对照组(DMSO)相比,CD24^(high)和CD24^(low)细胞经铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理后MDA水平增加,其中CD24^(low)细胞的MDA含量比CD24^(high)更高(t=10.763,P=0.006;t=24.067,P<0.001)。Western blot实验结果表明,NF2与YAP在CD24^(low)和CD24^(high)细胞的蛋白含量差异有统计学意义(t=-4.331,P=0.012;t=4.219,P=0.013),CD24^(low)细胞中YAP的蛋白表达更高(t=4.219,P=0.013),而CD24^(high)细胞中NF2的蛋白表达更高(t=-4.331,P=0.012)。在CD24^(high)MDA-MB-231细胞中构建NF2敲除或(和)YAP过表达细胞株,并用实时定量RT-PCR和Western blot检测,结果显示铁死亡关键蛋白FSP1在4组间的表达差异有统计学意义(F=30.297,P<0.001)。同时,检测NF2敲除或(和)YAP过表达后CD24^(high)MDA-MB-231细胞的铁死亡情况,结果表明敲除NF2或(和)过表达YAP后加入铁死亡诱导剂Erastin均可在一定程度上促进细胞死亡(F=38.911,P<0.050),其中在NF2敲除联合YAP过表达条件下,CD24^(high)MDA-MB-231细胞死亡率最高,而在Erastin的基础上添加铁死亡抑制剂Fer-1后细胞的死亡率下降,4组间比较差异无统计学意义(F=0.256,P=0.855)。结论在CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞中敲除NF2联合过表达YAP会抑制FSP1表达,促进细胞铁死亡。
关键词
乳腺肿瘤
铁死亡
成纤维细胞特异蛋白1
NF2
YAP
Keywords
Breast neoplasms
Ferroptosis
Fibroblast-specific protein 1
NF2
YAP
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NF2/YAP信号通路通过FSP1诱导CD24高表达的三阴性乳腺癌细胞铁死亡
蒲卢兰
李静佳
陈宇
周瑜清
荣欣欣
侯令密
周方方
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2024
0
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