转录因子YY1上调PD-L1表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用研究

目的研究转录因子阴阳1(Yin-Yang1,YY1)上调程序性死亡分子配体1(PD-L1)表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用。方法采用免疫组化法检测胆囊癌组织、癌旁组织、正常胆囊组织中YY1蛋白表达水平,体外培养正常人胆囊上皮细胞系HGBEC和人胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996、IH-GB1,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定各细胞中YY1水平;YY1 siRNA-1675转染GBC-SD细胞。实验分为BC组、YY1 siRNA NC组、YY1 siRNA-1675组。流式细胞仪测定PD-L1、CD69、CD25水平及人T淋巴细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平;PROMO网站预测YY1的潜在靶基因,行双荧光素酶报告实验验证。结果与正常组织相比,癌旁组织、胆囊癌组织中YY1阳性表达率显著升高(P<0.05),与癌旁组织相比,胆囊癌组织中YY1蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);与人胆囊上皮HGBEC细胞相比,人胆囊癌IH-GB1、SGC-996、GBC-SD细胞中YY1水平显著升高(P<0.05),其中GBC-SD细胞中YY1水平最高,因此后续实验以GBC-SD细胞进行。与BC组、YY1 siRNA-NC组相比,YY1 siRNA-1675组IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、CD69、CD25水平显著升高(P<0.05),YY1、PD-L1水平和人T淋巴细胞凋亡率明显降低(P<0.05);PROMO网站预测表明,PD-L1是YY1的靶基因,双荧光素酶报告实验证明PD-L1是YY1的作用靶点。结论下调YY1水平可靶向抑制PD-L1表达,可能通过此机制抑制胆囊癌免疫逃逸。

PON1基因低表达对肝癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响

目的探讨对氧磷酶1(PON1)低表达对肝癌细胞增殖和细胞克隆能力的影响。方法提取肝癌组织及癌旁正常组织标本RNA测定PON1 mRNA的相对表达水平,ELISA法检测肝癌患者和健康人血清PON1蛋白水平。培养人肝癌细胞系PLC和Huh7,对PLC和Huh7细胞系进行转染,分为对照组和转染组(转染siPON1小干扰RNA进行基因沉默实验),使用实时荧光定量PCR及ELISA法验证转染效率,CCK-8实验检测转染后肝癌癌细胞增殖能力的变化,克隆形成实验检测细胞形成克隆的能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blot实验检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路相关蛋白变化。结果肝癌组织中PON1 mRNA相对表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05),肝癌患者血清PON1蛋白水平低于健康人(P<0.05)。与对照组比较,转染组PON1 mRNA相对表达水平和PON1蛋白水平降低(P<0.05),细胞增殖能力明显增强(P<0.05),细胞克隆形成率明显增多(P<0.05),S期细胞比例明显增多(P<0.05),p-AMPK表达水平明显降低,p-mTOR表达水平明显升高。结论PON1表达调控了AMPK信号通路活化并抑制了肝癌细胞增殖。