miR-182-5p和自噬在外周血单个核细胞和THP-1细胞痛风性关节炎模型炎症反应中的研究

目的:探讨miR-182-5p及自噬参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:采用尿酸盐(MSU)晶体刺激健康男性外周静脉血建立痛风炎症模型,在0、1、2、4、6、8 h分离血浆及提取外周血单个核细胞(PBMCs)。培养THP-1细胞,给予MSU晶体刺激建立痛风炎症模型,分别在0、3、6、9、12 h时间点收集细胞及上清液。实时荧光定量PCR检测PBMC和THP-1中IL-1βmRNA、linc00173、linc00963、miR-182-5p和LC3-2 mRNA水平;Western Blot技术检测IL-1β蛋白和LC3-2蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测血浆和上清液中IL-1β蛋白浓度。结果:MSU刺激健康男性外周血后PBMCs中IL-1βmRNA水平在1、2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05),血浆IL-1β蛋白浓度水平在1、2、4、6 h较0 h增高(P<0.05),PBMCs中IL-1β蛋白水平在2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中linc00173水平在1、2、4 h较0 h增高(P<0.05),linc00963水平在1、2 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在4 h较0 h降低(P>0.05),在8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中LC3-2 mRNA水平在4、6、8 h较0 h增高(P<0.05);LC3-2蛋白水平在6、8 h较0 h增高(P<0.05)。MSU刺激THP-1细胞:THP-1细胞中IL-1βmRNA水平和上清液IL-1β蛋白浓度在3、6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),THP-1细胞IL-1β蛋白水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05)。linc00173水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在6 h较0 h增高(P<0.05)。LC3-2 mRNA水平在6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),LC3-2蛋白水平在12 h较0 h增高(P<0.05)。结论:miR-182-5p可能与linc00173和linc00963相互作用,通过调控自噬参与痛风炎症反应。

抗IL-17A单抗调控痛风自噬及痛风炎症的机制

目的探讨抗IL-17A单抗(司库奇尤单抗,secukinumab)调节痛风自噬及痛风炎症的机制。方法收集57份急性期痛风(acute gout,AG)、57份间隙期痛风(intermittent gout,IG)患者和82份健康志愿者外周静脉血,RT-qPCR法检测自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)ATG4B、ATG7、ATG16L1、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)mRNA转录水平。在健康志愿者外周静脉血中加入单钠尿酸盐(monosodium urate,MSU)晶体,建立急性痛风炎症模型,RT-qPCR和ELISA法检测在0、1、2、4、6、8 h及不同浓度(0、100、200、400μmol/L)司库奇尤单抗作用下IL-1β转录及蛋白表达水平。将健康志愿者外周血分为对照(未经MSU处理)、MSU(100μg/mL)、MSU+秋水仙碱(100μg/mL+30μg/mL)、MSU+司库奇尤单抗(100μg/mL+400μmol/L)组,RT-qPCR和Western blot法检测IL-1β、ATG mRNA转录及蛋白表达水平,ELISA法检测IL-1β、IL-12、IL-35表达水平。结果AG、IG和健康对照组间ATG4B、Beclin-1和LC3B mRNA转录水平差异均有统计学意义(F分别为3.896、11.78、3.856,P均<0.05),其中AG组均低于IG及HC组(t分别为2.692、3.234、2.231和2.085、4.795、2.748,P均<0.05);ATG16L1 mRNA转录水平在3组间差异有统计学意义(F=7.949,P<0.001),其中AG组显著低于HC组(t=3.860,P<0.001)。在急性痛风炎症模型中,IL-1βmRNA转录及蛋白表达水平在2~4 h达到高峰,司库奇尤单抗浓度在400μmol/L时抗炎作用最强。与MSU组相比,MSU+司库奇尤单抗组ATG16L1、LC3B mRNA转录水平均显著降低(t分别为2.343、2.916,P均<0.05),ATG4B、ATG7、Beclin-1、ATG16L1、LC3B-Ⅱ蛋白表达水平均显著降低(t分别为28.84、11.6、8.402、4.124、2.458,P均<0.05);对照、MSU、MSU+秋水仙碱、MSU+司库奇尤单抗组间IL-12和IL-35蛋白表达水平差异均有统计学意义(F分别为7.009、6.518,P均<0.01),与MSU组相比,MSU+司库奇尤单抗组中IL-12蛋白表达水平显著降低(t=2.604,P<0.05),IL-35蛋白表达水平也降低,但差异无统计学意义(t=1.928,P>0.05)。结论司库奇尤单抗可调控自噬相关基因mRNA及蛋白表达,降低促炎细胞因子水平,抑制痛风炎症,为痛风治疗提供了参考。