miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4)和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果:RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高(P<0.001)。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低(P<0.01)。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移(P<0.001)和侵袭能力(P<0.01)明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低(P<0.01)。结论:miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

微小RNA-6775-3p在乳腺癌组织中的甲基化状态及其临床意义

目的探讨微小RNA-6775-3p(miR-6775-3p)在乳腺癌组织中的甲基化状态及其临床意义。方法甲基化特异性PCR检测63例乳腺癌患者乳腺癌组织及其癌旁正常组织中miR-6775-3p启动子区CpG岛甲基化水平。实时荧光定量PCR法分析乳腺癌组织中miR-6775-3p表达。分析miR-6775-3p启动子区甲基化状态与乳腺癌患者临床病理参数及预后关系。结果乳腺癌组织中miR-6775-3p启动子区甲基化阳性率高于癌旁正常组织(76.2%vs.19.0%)(P<0.01)。miR-6775-3p启动子区甲基化阳性率与TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及远处转移或复发密切相关(P<0.05)。与15例miR-6775-3p启动子区未甲基化患者比较,48例miR-6775-3p启动子区甲基化患者乳腺癌组织中miR-6775-3p基因表达水平较低(2.743±0.257 vs.4.521±0.399)(P<0.01),生存时间较短[(40.44±4.18)个月vs.(48.80±2.59)个月](P<0.05),累计生存率较低(75.0%vs.80.0%)(P<0.05)。结论miR-6775-3p甲基化可能导致其在乳腺癌组织中低表达,可能与乳腺癌的肿瘤浸润、转移及预后相关。