抗菌肽urumin与甲型流感病毒H1N1 HA蛋白的相互作用研究

甲型H1N1流感严重影响人类的健康和破坏全球经济发展,抗菌肽urumin可特异性结合H1N1病毒血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白的保守茎部,但其结合位点和作用机制尚不明确。本研究通过分子对接和ELISA (enzymelinked immunosorbent assay)实验研究urumin与HA蛋白作用可能的结合位点、关键氨基酸,提示HA残基His32(HA1)、Asp19 (HA2)和Trp21 (HA2)是HA与urumin作用的关键残基。Urumin的Arg4、Asn9和Cys16与HA蛋白残基Asp19 (HA2)、Trp21 (HA2)、His32 (HA1)和Asn53 (HA2)形成氢键相互作用, Trp12与HA的His32 (HA1)形成芳香π堆积作用,维持urumin与HA蛋白的结合。在293T细胞中表达野生型HA及其丙氨酸突变体[丙氨酸替换His32(HA1)、Asp19 (HA2)和Trp21 (HA2)], ELISA实验结果显示, urumin与野生型HA的亲和力显著高于HA丙氨酸突变体,提示His32 (HA1)、Asp19 (HA2)和Trp21 (HA2)可能是HA与urumin作用的关键残基。本研究为urumin的进一步改造和应用提供了理论和实验基础。

温度、pH值和H_(2)O_(2)对减毒沙门氏菌VNP20009的生长及生物膜形成的影响

减毒沙门氏菌VNP20009具有较好的在肿瘤中定殖、复制并发挥一定抗肿瘤作用的特性,可作为抗癌药物载体或与其他疗法(如化疗)联用,具有较好应用前景。本文对VNP20009的生物学性质进行研究,检测了VNP20009在不同温度、pH值及H_(2)O_(2)作用下的生长曲线及细菌生物膜的形成。结果表明,VNP20009在42℃、弱酸性环境pH 6.5以及H_(2)O_(2)(1 mmol·L^(-1))条件下可正常生长,弱酸性环境有益于VNP20009生物膜的形成。本实验结果对深入研究减毒沙门氏菌的生存机制和应用提供了基础。

人硫氧还蛋白治疗小鼠溃疡性结肠炎的药效学作用

本研究旨在利用基因工程技术表达重组人硫氧还蛋白(recombinant human thioredoxin,rhTXN),并在葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型上验证其治疗效果。从Jurkat细胞的cDNA中克隆出人硫氧还蛋白基因TXN,采用限制性酶切法构建pCold TF-rhTXN重组表达质粒,在大肠杆菌中表达后,利用镍柱纯化、再通过酶切去除融合表达标签、获得完整的rhTXN重组蛋白,并用胰岛素还原法检测其二硫键还原酶活性。本研究中的动物实验是按照南京大学实验动物福利伦理审查委员会的伦理指导方针进行的。3%DSS自由饮用诱导小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,腹腔注射rhTXN,通过体重变化、结肠长度和苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色切片研究其治疗效果。利用活体成像研究rhTXN对DSS小鼠的靶向性。利用GEO数据库的GSE107499数据集筛选UC炎症部位的枢纽基因并研究与TXN的相关性。实验结果显示,具有活性的rhTXN成功表达和纯化,rhTXN(100μg·kg^(-1))在维持DSS小鼠体重变化(P=0.0005)和减少肠道损伤上(P<0.0001)有显著治疗效果,并对DSS小鼠有结肠靶向性。GSE107499数据集中UC患者炎症部位TXN有极显著的下调(P<0.01),并与枢纽基因CD40有极显著的负相关(P<0.01),与纤连蛋白1(fibronectin 1,FN1)有极显著的正相关(P<0.01)。本研究成功制备出具有生物活性的rhTXN,并证明对DSS小鼠模型有较好的治疗效果,而TXN基因与UC枢纽基因CD40和FN1有显著相关性。