基于磁性微球的自动化抗体筛选系统及其应用

抗体药物在疾病诊断、治疗和预防方面发挥越来越重要的作用,其生物活性、纯度、免疫原性和生产成本高度依赖于下游纯化工艺的技术水平,基于磁性微球的自动化抗体纯化方法与传统的琼脂糖抗体纯化方法不同,采用先进的磁珠分离技术,结合自动化设备与软件系统,可以从多种来源的样本中快速分离纯化出质量稳定、批间差异小的抗体。基于磁性微球的自动化抗体筛选系统兼具磁性分离的快速性、免疫反应的特异性、以及自动化高通量的特性,能够满足大规模抗体筛选的要求。本文详细介绍了基于磁性微球的自动化抗体筛选系统的原理、过程以及应用,通过实验证明该系统与传统琼脂糖纯化方法的优势,以期为进一步的抗体纯化筛选研究明确方向或提供参考。

汽巴蓝F3GA染料亲和色谱介质的制备及其对黑芸豆凝集素的特异性吸附

采用反相悬浮再生法制备6 g/100 mL的琼脂糖微球,采用环氧氯丙烷对琼脂糖微球进行二次交联,并进行染料配体汽巴蓝F3GA的偶联,得到一种新型活性Blue Beads 6FF微球。通过傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜、压力流速曲线、溶胀率、泄漏率和孔隙率等对微球物理性能进行表征。结果发现,微球球形度较好,粒径大小均一,平均粒径为56.37μm左右,具有较高的孔隙率、溶胀率及广范围的pH值稳定性,且耐压能力强。以黑芸豆凝集素为目标蛋白,通过Langmuir吸附等温式拟合,结果表明该填料对黑芸豆蛋白有较高的吸附量(19.7 mg/mL),微球吸附性能良好,可实现对凝集素蛋白的快速分离和纯化。

抗小鼠IgG纳米抗体的制备及应用

目的构建抗小鼠免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)纳米抗体文库,筛选抗小鼠IgG的纳米抗体,并制备小鼠IgG的特异性亲和层析介质。方法以小鼠IgG为靶点,构建纳米抗体文库,利用噬菌体筛选技术对纳米抗体文库进行筛选。得到的纳米抗体经重组表达和纯化后制备成小鼠IgG亲和层析介质,并利用小鼠血清进行测定和验证。结果构建了多样性好且库容量达2.3×107 cfu的初始文库,经3轮淘选后,共筛选出4条有结合活性的纳米抗体序列,其中纳米抗体2E2经预活化填料偶联后,对小鼠IgG载量可达18.55 mg/mL,可用于小鼠IgG的纯化和检测。结论利用噬菌体筛选技术成功筛选出抗小鼠IgG的纳米抗体,并制备出特异性亲和小鼠IgG的亲和层析介质。