流式细胞技术检测血小板相关抗体在诊断免疫性血小板减少症中的应用价值

目的:探讨并研究采用流式细胞技术检测血小板相关抗体在诊断免疫性血小板减少症中的应用价值。方法:将常州市第三人民医院收治的60例免疫性血小板减少症患者(其病情均经综合检查得到确诊)和同期在该医院进行体检的60例健康人作为研究对象。将其中60例免疫性血小板减少症患者作为观察组,将其中60例健康人作为对照组。采用流式细胞技术对两组研究对象进行血小板相关抗体检查,同时对其巨核细胞的水平和血小板计数进行检测,然后比较两组研究对象检测的结果。结果:观察组患者血小板相关免疫球蛋白G(PAIgG)、血小板相关免疫球蛋白A(PAIgA)和血小板相关免疫球蛋白M(PAIgM)的水平均高于对照组健康人,P<0.05。观察组患者PAIgG、PAIgA和PAIgM的阳性检出率均高于对照组健康人,P<0.05。观察组患者巨核细胞的水平和血小板计数均高于对照组健康人,P<0.05。结论:采用流式细胞技术检测血小板相关抗体能明确血液中血小板相关免疫球蛋白抗体的变化情况,对诊断免疫性血小板减少症具有积极的意义。

2017—2018年常州市学校饮用水微生物指标检测分析

目的了解常州市中小学饮用水微生物污染状况,为卫生监管提供参考依据。方法2017—2018年随机抽取常州市中小学直饮水水质处理器出口水和桶装饮水机冷水嘴出口水水样,按照GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》检测水样中菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希菌。结果2017和2018年菌落总数、大肠菌群的合格率比较,差异均有统计学意义(χ^2=31.341、19.317,均P<0.01)。2017年城区学校桶装饮用水和农村学校桶装饮用水的合格率比较,差异有统计学意义(χ^2=7.575,P<0.01)。2017和2018年农村学校直饮水合格率比较,差异无统计学意义(χ^2=1.886,P>0.05)。同年内小学和中学饮用水合格率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2017年大肠菌群检出率农村学校桶装饮用水>城区学校桶装饮用水>农村学校直饮水,差异有统计学意义(P<0.05)。结论2017年常州市学校饮用水检测合格率较低,尤其是农村学校桶装饮用水和农村学校直饮水卫生状况较差。2018年常州市学校饮用水的合格率总体有较大提升,但农村学校直饮水的合格率提升不明显,应重点加强卫生监管。

中小学及托幼机构急性胃肠炎患者诺如病毒流行病学研究

目的 分析常州市武进区突发公共卫生事件中来自中小学及托幼机构的急性胃肠炎患者诺如病毒感染流行病学特征,以期为该地区诺如病毒的科学防控提供依据。方法 收集常州市武进区2020年11月—2022年10月突发公共卫生事件中涉及中小学及托幼机构的有急性胃肠炎症状者(n=231)及与其密切接触的无症状人员(n=95)的肛拭子样本,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对样本进行诺如病毒及基因分型检测。结果 326份样本中,诺如病毒阳性检出率为45.09%(147/326);诺如病毒基因分型以GⅡ型为主,占85.71%(126/147)。140例诺如病毒阳性的急性胃肠炎患者的主要临床表现为呕吐(占95.71%, 134/140),且GⅠ型诺如病毒感染患者的呕吐症状更严重。4~6月的诺如病毒阳性检出率最高,为59.21%(45/76);男性感染诺如病毒的风险更高,诺如病毒阳性检查率达54.94%(89/162)。年龄小是诺如病毒的易感因素,0~6岁婴幼儿的诺如病毒阳性检出率最高(56.69%),其次为7~12岁儿童(46.43%)。结论 常州市武进区突发公共卫生事件中,诺如病毒感染患者的临床症状多为呕吐,且诺如病毒以GⅡ基因型为主。诺如病毒感染好发于春季和冬季,男性和0~6岁婴幼儿是易感人群,相关机构需在高发期加强对诺如病毒的监测和防控工作。

2011—2015年常州市手足口病流行病学特征及病原学监测结果

目的了解常州市手足口病流行病学及病原学分布特征,为手足口病的防治提供依据。方法采用描述流行病学方法,对2011—2015年常州市手足口病数据进行分析。结果 2011—2015年常州市共报告手足口病病例3 7735例,重症数91例,死亡数1例,年平均发病率为160.88/10万;发病高峰在5—6月,次高峰在11—12月;金坛、溧阳市、武进区发病率高于其他县区;男性发病率高于女性;病例主要集中在1~3岁组,绝大多数为幼托和散居儿童;5年间我市共报告实验室确诊病例1 741例,普通病例中以其他肠道病毒为主,重症病例中以EV71为主,两者病原构成不同,差异有统计学意义(χ~2=89.54,P<0.05)。结论常州市手足口病具有明显的季节、人群和地区差异,应科学开展监测工作,为防控手足口病提供依据。

2017-2018年常州市甲型H3N2流感病毒血凝素基因特征分析

目的了解2017—2018年江苏省常州地区H3N2流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因的流行特征和变异情况。方法收集2017年4月至2018年3月常州市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子标本,用实时荧光定量RT-PCR的方法检测流感病毒核酸,H3N2阳性标本进行病毒分离,获得毒株后进行HA基因扩增和测序。结果在2017年4月至2018年3月间共分离获得28株甲型H3N2流感病毒毒株,经基因测序后构建系统进化树,发现其全部属于Group3C.2a,与同期疫苗株A/Hong Kong/4801/2014类似。将常州市分离的甲型H3N2流感病毒株与A/Hong Kong/4801/2014疫苗株在HA氨基酸序列上进行差异分析,发现常州分离的流行毒株在HA抗原决定簇(A-E)区域,有10个氨基酸位点突变,在HA抗原的茎部区域有2个氨基酸位点突变。结论2017年4月至2018年3月间常州市流行的H3N2流感病毒与同期疫苗株A/Hong Kong/4801/2014(group 3C.2a)分布在同一进化分枝上,呈现1个基因亚组为主流的流行趋势,但HA抗原决定簇有部分氨基酸位点发生了突变,提示可能有变异发生,可能会对疫苗免疫效果产生一定的影响,需要在今后的工作中加强监测。

细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的T细胞依赖性B细胞产生抗体的促进作用

目的研究ICOS—GL50信号在T细胞依赖性B细胞体外增殖、抗体分泌中的作用，进一步探讨细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的体液免疫中的作用。方法分别采用台盼蓝活细胞计数法和ELISA法检测ICOS—L929基因转染细胞和细胞因子IL—10对PWM介导的B细胞体外增殖及分泌抗体的效应。结果ICOS-L929基因转染细胞能够促进PWM介导的B细胞体外增殖，而不能显著上调抗体的分泌；加入IL-10后，能显著促进PWM介导的B细胞体外增殖和抗体分泌。结论细胞因子IL-10在ICOS—GL50信号介导的机体T细胞依赖的体液免疫应答反应中发挥着重要的协同作用。

作业场所空气中溴的离子色谱测定法

目的建立以离子色谱法测定作业场所空气中溴的检测方法。方法用NaCO3-NaHCO3作吸收液,采用气泡吸收管采集一定体积空气,利用离子色谱法进行定性定量分析。结果该方法的相对标准偏差RSD为0.23%,平均回收率为99.3%。结论该方法灵敏度高,回收率好,且样品预处理简单,是一种有效的空气中溴的检测方法。

常州地区2012年乙型流感病毒株血凝素基因特征分析

目的分析常州地区2012年乙型流感病毒株血凝素基因的特征。方法采用MDCK培养方法分离常州地区2012年乙型流感病毒,采用一步法RT-PCR方法扩增病毒株表面血凝素基因并测序,采用相应的生物信息软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及进化树分析。结果成功分离获得14株乙型流感病毒株,其中B/Changzhou/01/2012株与其他13株的亲缘关系较远,13株病毒株间亲缘关系较近;与参考病毒株B/Hong Kong/330/2001相比,该13株病毒株均在10个氨基酸位点发生变化,其他位点氨基酸变化呈散在性分布特点。根据进化树分析结果,病毒株可分为A群、B群、C群3群,A群和B群为2012年常州地区乙型流感病毒优势株,C群则为散发病例。结论常州地区人群中流行的乙型流感病毒基因特性在逐渐发生变异,流感监测工作必须加强对流感病原学的监测,及时发现流感病毒变异株。

尘螨变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞中协同刺激分子和细胞因子的异常表达及其意义

目的分析变应原刺激前后变应性哮喘患儿外周血T淋巴细胞表面协同刺激分子及胞内细胞因子表达的变化,探讨CD28家族不同协同刺激信号在变应性哮喘免疫病理机制中的作用。方法选取尘螨变应性哮喘患儿(哮喘组)和健康儿童(健康对照组)各30例,密度梯度离心法分离其外周血单个核细胞,应用免疫荧光标记和流式细胞术检测尘螨刺激前后体外培养的CD4+T淋巴细胞表面协同刺激分子CD28、可诱导共刺激分子(ICOS)和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的表达,运用细胞内染色技术检测CD4+T淋巴细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、IL-4和IL-13的表达。并运用统计学方法比较哮喘组和健康对照组之间的差异。结果哮喘组患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面CD28和ICOS的表达与健康对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05),而CTLA-4的表达显著降低(P<0.01);细胞内IFN-γ表达水平显著升高(P<0.000 1),而IL-4和IL-13表达水平无明显变化(Pa>0.05)。经尘螨刺激后,体外培养的哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面ICOS的表达较健康对照组儿童显著上调(P<0.000 1),CD28和CTLA-4的表达则无明显变化(Pa>0.05);细胞内细胞因子IL-4和IL-13的表达显著上调(Pa<0.000 1),而IFN-γ的表达则无明显差异(P>0.05)。结论变应性哮喘患儿外周血存在组成性的CTLA-4的表达下调和细胞因子IFN-γ的表达上调,介导Th1型细胞的异常活化;而变应原尘螨的刺激又介导了ICOS依赖的Th2型细胞的分化,导致Th1/Th2失衡。

尘螨变应性哮喘患儿外周血辅助性T淋巴细胞和调节性T淋巴细胞的表达及其临床意义

目的分析尘螨阳性的哮喘患儿外周血辅助性T淋巴细胞（Th）和调节性T淋巴细胞（Treg）的表达及其临床意义。方法选取尘螨阳性的哮喘患儿（尘螨阳性哮喘组）和健康儿童（健康对照组）各30例。采集2组儿童外周血，密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞（PBMC），胞内染色技术和流式细胞术检测尘螨刺激前后CD4-T淋巴细胞内干扰素-γ（IFN-γ）、IL4和叉状头螺旋转录因子（Foxp3）的表达，尘螨刺激后，PBMC中分别加入阻断型抗人可诱导共刺激分子（ICOS）、抗人CD28或抗人细胞毒T淋巴细胞相关抗原（CTLA-4）单克隆抗体共培养3d后，检测Thl（CD4＋IFN-γ＋T淋巴细胞）、Th2（CD4＋IL4＋T淋巴细胞）和Treg（CD4＋CD25＋Foxp3＋T淋巴细胞）的表达，比较各组之间的差异。结果与健康对照组相比，尘螨阳性哮喘组尘螨刺激前外周血Thl细胞显著增加（P〈0．05），Treg细胞显著减少（P〈0．05），Th2细胞差异无统计学意义（P〉0．05）；与刺激前相比，尘螨刺激后Th1和Treg细胞变化均无统计学意义（P均〉0．05），Th2细胞显著增加（P〈0．01）；加入抗ICOS和抗CD25单克隆抗体后，Thl细胞和Treg细胞变化无统计学意义，Th2细胞显著减少（P均〈0．0001）；加入抗cTLA4单克隆抗体后，Th1、Th2和Treg细胞变化差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论尘螨变应性哮喘患儿外周血中存在组成性的不依赖抗原刺激的Th1异常表达和Treg的表达减少，同时存在抗原诱导性，依赖ICOS和CD25信号的Th2异常活化。

金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)重组酶聚合酶扩增方法的建立

目的建立一种基于重组酶聚合酶(recombinase polymerase amplification,RPA)扩增方法金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)的快速检测方法,为广泛耐药菌基因类型的确定提供技术支持。方法遵照重组酶聚合酶扩增引物和探针设计原则,以bla_(NDM)基因特异性序列为靶基因,设计相应的RPA扩增引物和探针。取梯度稀释已知拷贝数的DNA模板和致病菌核酸样品进行各扩增体系的RPA扩增实验,分析扩增体系的敏感性、特异性和重复性特征以便筛选和评价bla_(NDM)基因的RPA扩增体系。结果 3组扩增体系的引物和探针能够有效的扩增靶基因,检出限达到2×10~2copys/反应,与其他细菌样品无非特异性扩增反应,能够在2～7 min内实现靶基因有效扩增。结论建立了金属β内酰胺酶基因bla_(NDM)的重组酶聚合酶扩增体系,该反应迅速,检出限较低,具有较高的特异性,适用于耐药菌的现场检测。

水中五氯酚残留的快速连续测定法

目的建立连续、快速、灵敏的测定水中五氯酚残留的方法。方法采用全自动顶空固相微萃取技术对样品进行预处理,优化萃取和气相色谱条件,并对实际样品进行检测。结果建立了全自动顶空固相微萃取气相色谱法测定水中五氯酚残留的方法,方法线性范围0.053～106μg/L,r=0.999 9,最低检出限为0.008 2μg/L,加标回收率在92.1%～106.7%之间,相对标准偏差小于5.3%。结论该法简便快速,灵敏度高,准确度好,适用于水中五氯酚残留的连续测定。

微波消解电感耦合等离子体-质谱法测定面粉中的铝

面粉样品经微波消解后,以^(45)Sc为内标元素校准基体效应及信号漂移,用电感耦合等离子体.质谱法直接测定,外标法绘制校准曲线进行定量。测定面粉中铝的检出限为0.25mg/kg,线性良好,相关系数r=0.9999,相对标准偏差1.25%—3.03%,加标回收率在93.9%—103.5%之间。该方法灵敏快速,干扰小,重现性好,能满足面粉中铝含量测定的要求。

综合干预对小学生视力的影响

目的 探讨综合干预法对小学生各年级视力的影响。方法 采用整群抽样方法选择常州市钟楼区2所办学规模与硬件设施相当的小学,在2014年4月底对所有研究对象进行基线视力检查,选择基线、终期视力检查均有效的一至五年级学生3 159人,其中干预组1 480人,在开展正常防近活动的基础上,采取综合干预措施,对照组1 679人,按照区里及学校的安排正常开展各种防近活动,2015年5月初进行终期视力检查并对干预效果进行分析。结果 干预组除一年级学生外其他年级学生干预后视力均有不同程度提高,各年级轻度及重度视力不良检出率均有下降,学生总体视力不良检出率明显下降,差异有统计学意义（P〈0.01）;对照组一至四年级学生1 a后视力均有明显下降,差异有统计学意义（t〉3.3,P〈0.01）,五年级学生视力1 a后有下降,但差异无统计学意义（P〉0.05）;对照组中度及重度视力不良学生比例均有明显提高,各年级学生视力不良检出率均增加,差异均有统计学意义（χ^2=116.82,P〈0.01）。结论 综合干预对控制小学生视力下降有明显作用,可以推广应用。

饮用水中莠去津的固相萃取-液相色谱-质谱法测定

目的:建立饮用水中莠去津的固相萃取-液相色谱-串联质谱(SPELC-MS/MS)的检测方法。方法:采用固相萃取技术,水样经Waters Oasis HLB柱富集,高效液相色谱柱分离,乙腈和甲酸水梯度洗脱,用飞行时间质谱检测,ESI正离子模式下采集数据,外标法定量。结果:该方法的检测限为0.1μg/L,相关系数r>0.999。平均回收率在:82.6%～92.8%,相对标准偏差在1.5%～2.3%。结论:方法灵敏度高、操作简单、定量准确、测定浓度范围宽阔,是环境水质样品中莠去津含量检测的理想方法。

B7-H3和Toll样受体4分子在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨B7-H3和Toll样受体4（TLR4）分子在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集142例结直肠癌患者的肿瘤组织及临床资料，免疫组织化学方法检测B7-H3和TLR4分子在肿瘤组织中的表达，并对结果进行统计学分析。结果肠癌组织中B7-H3分子的表达与淋巴结转移和远处转移明显相关（P〈0．05），TLR4分子的表达与淋巴结转移明显相关（P〈0．05）。B7-H3和TLR4分子的表达有相关（P〈0．05）。B7-H3与TLR4共同高表达44例，B7-H3高表达而TLR4低表达者23例，B7-H3低表达而TLR4高表达36例，共同低表达39例。生存分析结果显示肿瘤组织中B7-H3或TLR4分子表达水平低的患者其生存率显著高于表达水平高的患者（P〈0．05）。结论B7-H3和TLR4的表达水平与结直肠癌临床特征相关，可能参与了结直肠癌的免疫病理过程。