成人骨髓基质干细胞体外诱导成骨细胞

目的 建立成人骨髓基质干细胞(BMSCs)分离、扩增以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法 抽取健康成人骨髓组织,用 Percoll分离液分离出骨髓中的单个核细胞,在含体积分数为 10%小牛血清的高糖 DMEM培养液中,置于37℃、含体积分数为5%的CO2 湿化空气孵箱中培养,通过传代培养扩增BMSCs,传三代时改用含地塞米松、β 甘油磷酸和维生素C的条件培养基培养,用倒置显微镜、HE染色观察增殖和分化情况,并测定碱性磷酸酶活性和钙结节形成能力。结果 体外培养的成骨细胞生长良好,表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性。结论 所建立的成人 BMSCs分离、扩增以及诱导和分化为成骨细胞的体外培养方法稳定和实用,可作为骨组织工程种子细胞来源的常规方法之一。

结缔组织生长因子在脑胶质瘤组织中的表达和肿瘤级别的关系

目的通过检测人脑胶质瘤患者肿瘤组织中结缔组织生长因子的表达水平，探讨其和肿瘤级别的关系及作用机制。方法采用荧光实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测结缔组织生长因子（CTGF）mRNA在47例脑胶质瘤组织和25例正常脑组织中的表达水平，统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系。结果CTGF在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级（高分化组）及胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级（低分化组）中的表达均明显高于正常脑组织（P〈0．01），而且在Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中的表达量显著高于胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级（P〈0．01），说明随着肿瘤级别的升高CTGF表达也增强。结论CTGF在胶质瘤组织中高表达，而且表达水平和恶性程度有密切联系。CTGF的检测可作为胶质瘤恶性程度判断的参考，为从基因水平上探讨胶质瘤的生物学行为、预后及治疗提供新的思路．

上皮-间充质转化相关蛋白在食管癌中的表达及其临床意义

目的探讨上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)及波形蛋白(Vimentin)在食管癌组织中的表达水平及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法及组织芯片技术,分别检测105例食管癌组织和11例食管正常组织中E-cadherin、Cytokeratin及Vimentin的蛋白表达水平,并分析其与患者临床参数的相关性及相互之间的差异。结果根据免疫组织化学染色评分进行分组,105例食管癌组织中,E-cadherin高表达63例,低表达42例;Cytokeratin高表达51例,低表达54例;Vimentin高表达35例,低表达70例。E-cadherin在正常组织(H-score:172.7±40.7)中的表达水平显著高于肿瘤组织(H-score:31.9±33.1)(P<0.0001);Cytokeratin在正常组织(H-score:272.7±12.0)及肿瘤组织(H-score:250.1±71.1)中的表达水平差异无统计学意义(P=0.4481)。在105例食管癌组织中,肿瘤≥3.5 cm组中的Cytokeratin表达水平显著低于肿瘤<3.5cm组(P=0.0137);Vimentin在正常组织[阳性细胞百分比(3.5±1.4)%]及肿瘤组织[阳性细胞百分比(10.2±22.7)%]的表达水平差异无统计学意义(P=0.1021)。E-cadherin高表达组中Vimentin的表达水平显著低于E-cadherin低表达组(χ2=4.464,P=0.0346)。结论上皮-间充质转化相关蛋白在食管癌发生与发展过程中表达水平的变化表明食管癌组织中存在上皮-间充质转化现象,对其进行深入研究将有助于阐明食管癌浸润及转移的分子机制。

组织因子在子宫颈病变过程中的表达及其与瘤内血管生成的关系

目的通过检测子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞状细胞癌组织中组织因子表达和微血管分布,探讨组织因子在子宫颈病变过程中表达水平的变化及与瘤内血管生成的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学方法,分别检测子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞状细胞癌组织中组织因子的表达和微血管分布。结果组织因子在正常子宫颈组织中均不表达,而在子宫颈病变过程中其表达水平显著上调(P<0.0001),瘤内微血管密度亦显著增加(P<0.0001);同时,子宫颈病变过程中组织因子的表达水平和瘤内微血管密度呈显著正相关(r=0.3705,P<0.0001),和患者年龄无关(P=0.7089)。结论组织因子参与子宫颈癌的发生与发展,并促进瘤内微血管形成,可作为一个潜在的子宫颈癌诊断和治疗的分子靶标并应用于临床。

Cystatin M在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的了解cystatin M在乳腺肿瘤中的表达及其临床意义。方法采用实时定量PCR检测52例乳腺肿瘤标本及邻近正常乳腺组织中cystatin M mRNA及内参GAPDH表达水平,分析cystatin M基因表达与临床病理参数的关系。结果乳腺癌标本的cystatin M含量与其周围邻近的正常乳腺组织及良性肿瘤中表达cystatin M含量无统计学意义;但发生淋巴结转移的乳腺肿瘤标本的cystatin M则明显低于其周围邻近的正常乳腺组织(P<0·05),也明显低于未发生淋巴结的乳腺肿瘤标本(P<0·05);乳腺癌标本cystatin M表达水平与乳腺癌病人的雌激素受体状态(ER)及孕激素状态(PR)无关。结论Cystatin M是一种监测乳腺癌是否发生转移的一种可靠的指标。

α1抗胰蛋白酶缺乏症的研究进展

α1抗胰蛋白酶缺乏症（alpha1-antitrypsin deficiency,AATD）是一种严重的基因紊乱性疾病,主要是由于编码α1抗胰蛋白酶（alpha1-antitrypsin,AAT）的基因突变引起血浆中蛋白酶抑制剂AAT的缺乏,从而使中性粒细胞弹性蛋白酶与蛋白酶抑制剂之间的平衡遭到破坏,中性粒细胞释放的弹性蛋白酶、组蛋白酶不断积累并降解肺组织的弹性蛋白,

乳腺癌白介素8基因表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织中白介素8(interleukin-8,IL-8)基因表达及其临床意义。方法建立实时定量RT-PCR方法,检测122例乳腺肿瘤及其邻近正常乳腺组织中的IL-8mRNA及内参GAPDH的表达水平,以IL-8N=(IL-8拷贝数/GAPDH拷贝数)来计算IL-8表达水平,并计算同一患者肿瘤组织与正常组织中IL-8N比值,定义为T/N比值,分析IL-8基因表达(T/N)与临床病理参数的关系。结果102例乳腺癌组织中IL-8N明显高于其周围邻近的正常乳腺组织(P<0.01),而8例乳腺良性肿瘤组织与其相应的正常乳腺组织中IL-8N水平无统计学差异(P=0.37)。乳腺癌组织中IL-8N及T/N比值明显高于乳腺良性肿瘤,且T/N比值与淋巴结转移呈正相关,而与绝经状态、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)状态呈负相关。结论乳腺癌组织高表达IL-8,实时定量RT-PCR技术检测乳腺癌组织中IL-8表达水平可作为评价乳腺癌进展及判断预后的指标。

环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

目的建立环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测临床标本中金黄色葡萄球菌(SA)的方法。方法基于金黄色葡萄球菌femA基因部分序列设计一套(共4条)特异性引物,包括特异性识别靶序列上6个不同区域的两条内引物和两条外引物。通过条件优化,建立检测SA的LAMP方法。用该法检测临床分离的40株SA、12种其他革兰阳性球菌和8种革兰阴性杆菌,对方法特异性进行评价。SA标准菌株ATCC 25923进行10n稀释后测定方法的灵敏度。用LAMP方法及普通培养法检测临床60份咽拭子标本,评价方法的准确性。结果 LAMP技术最佳反应温度为65℃,临床分离的40株SA检测阳性率达100%;其他菌株均无非特异性反应;最低检测限14 CFU/test。以培养法为标准,LAMP试验检测60份咽拭子标本的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值为87.5%、100%、100%和98.1%。结论 LAMP技术操作简便、快速、灵敏度高、特异性强,可于60 min内快速筛查咽拭子标本中SA。

2型糖尿病患者中载脂蛋白M与脂蛋白a、载脂蛋白AI的关系研究

目的研究2型糖尿病患者中载脂蛋白M(apolipoprote in M,apoM)与脂蛋白及其他载脂蛋白的相关关系。方法用dot-b lotting法检测73例2型糖尿病患者(36男37女)血浆中apoM的水平,酶法及比浊法检测糖尿病患者血浆中载脂蛋白AI(apoAI)、载脂蛋白B(apoB)、脂蛋白a[Lp(a)]、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及空腹血糖(G lu),ELISA法测定血浆中瘦素的含量,对apoM与其它脂蛋白、载脂蛋白、瘦素的关系作相关性分析。结果男性病例中,apoM负相关于甘油三酯(r=-0.364 8,P=0.028 7),但与年龄成正相关(r=0.375 2,P=0.026 4)。女性病例中apoM负相关于血浆Lp(a)水平(r=-0.442 0,P=0.007 0),正相关于apoAI/apoB(r=0.458 3,P=0.004 3)。男女病例混合分析发现,apoM负相关于Lp(a)(r=-0.338 5,P=0.003 0),正相关于apoAI(r=0.232 1,P=0.046 6)、瘦素(r=0.247 1,P=0.032 6)和年龄(r=0.242 0,P=0.035 2)。结论apoM负相关于Lp(a),正相关于apoAI、apoAI/apoB,提示了apoM可能是抑制动脉粥样硬化的保护因子。如果体内apoM与apoAI同时升高,可能会降低体内Lp(a)水平。

轻度认知损伤研究进展

随着老年人口的增加,老年认知功能障碍疾患也逐年增加,尤其是老年痴呆发病率的逐年上升及其高度的智力致残,给家庭和社会造成沉重的负担,为了能够对其早期诊断,早期干预,从而延缓病情进展,人们在深入研究老年痴呆的基础上开启了对轻度认知损伤的研究。近年来人们从不同的视角,采取多种研究手段与技术对轻度认知损伤的流行病学、病因、病理、临床表现,诊断,干预治疗等展开了研究,并取得了一定的进展。本文对其中一些结论进行综述,并对研究中仍存在的问题提出建议。

MT2-MMP在子宫颈癌变过程中的表达及其与瘤内血管生成的关系

目的探讨MT2-MMP在子宫颈癌变过程中表达水平的变化及其与瘤内血管生成的关系。方法采用组织芯片技术和免疫组织化学方法,分别检测子宫颈上皮内瘤变(CIN)和子宫颈鳞状细胞癌组织中膜型基质金属蛋白酶MT2-MMP的表达和瘤内微血管分布。结果 MT2-MMP在正常子宫颈组织中以不表达或低表达为主,而在子宫颈癌变过程中其表达水平显著上调。子宫颈鳞癌Ⅲ级及CINⅡ～Ⅲ级的患者,其MT2-MMP的表达水平显著高于CINⅠ级的患者(子宫颈鳞癌Ⅲ级vs CINⅠ级,P=0.0009;CINⅡ～Ⅲ级vs CINⅠ级,P=0.0323),子宫颈鳞癌Ⅰ～Ⅱ级的患者,其MT2-MMP的表达水平亦高于CINⅠ级的患者(P=0.0807);同时,子宫颈癌变过程中,MT2-MMP的表达水平和瘤内微血管密度呈显著正相关(r=0.3176,P=0.0015)。结论 MT2-MMP参与子宫颈鳞癌的发生与发展,并参与促进瘤内微血管的形成,其作为子宫颈鳞癌诊断和治疗潜在分子靶标的临床应用价值,值得进一步研究。

少数民族与汉族正常儿童P300认知电位的比较研究

P30 0是一种特殊的诱发电位 ,可作为评价认知功能的客观指标。本文不仅对汉族儿童进行了P30 0检测 ,而且对少数民蔟 (藏族、维吾尔簇、哈萨克族 )共 4种民族进行测定 ,研究是否由于文化背景、环境、地理条件等有不同 ,而在民族之间认知功能存在差异。采用声刺激诱发电位 ,靶与非靶二类不同音调声音刺激。结果表明 :民族之间P30 0潜伏期差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ,P30 0检测可以代表受试者认知的真实水平 ,它能客观敏锐地窥知脑功能的状态 ,P30 0潜伏期的变化在评价儿童认知功能方面提供了客观的电生理指标。

睾酮通过PI3K/mTOR信号通路促进子宫内膜癌细胞增殖的机制研究

目的证实睾酮促进子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的效应并探讨其具体的分子机制。方法常规培养子宫内膜癌Ishikawa细胞后,CCK-8法检测不同浓度睾酮对子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的影响,Western blot和qPCR法检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,同时检测PI3K/mTOR信号通路相关蛋白PI3K和mTOR的活化水平。结果 10、20、40、80 ng·mL^(-1)睾酮作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞48 h后,睾酮以剂量依赖性的方式促进细胞增殖。使用20 ng·mL^(-1)睾酮作用于细胞不同时间后,细胞倍增时间显著缩短(P<0.05)。Western blot和qPCR法结果表明,20 ng·mL^(-1)睾酮作用于细胞后显著上调了Bcl-2的表达水平(P<0.05),同时显著降低了Bax的表达水平(P<0.05)。Western blot发现20 ng·mL^(-1)睾酮作用于细胞后,PI3K和mTOR的活化水平显著上调(P<0.05)。结论睾酮能够促进子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖,该效应可能与激活PI3K/mTOR信号通路而调节其下游基因Bcl-2、Bax的表达有关。

STAT3诱骗寡核苷酸对肝癌细胞Hep G2的影响

目的观察应用诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)靶向阻断信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of tran-scription 3,STAT3)对肝癌细胞Hep G2的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外合成的STAT3 decoy ODNs在脂质体的介导下转染Hep G2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率;通过细胞生长曲线观察对细胞增殖的影响;annexin-V/PI染色检测细胞凋亡;实时定量PCR检测STAT3下游基因bcl-xL、cyclin D1和c-myc的表达。结果荧光显微镜和流式细胞仪检测表明decoy ODNs能有效转染Hep G2细胞,转染效率达90.2%;生长曲线显示decoy ODNs有效抑制Hep G2细胞增殖;decoy ODNs处理细胞48 h后,流式细胞仪annexin-V/PI染色检测到早期细胞凋亡率为(22.86±2.63)%,晚期细胞凋亡率为(23.00±2.76)%;实时定量PCR证实decoy ODNs下调bcl-xL、cyclin D1和c-myc mRNA表达。结论STAT3 decoy ODNs能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调STAT3下游bcl-xL、cyclin D1和c-myc基因的表达相关。

胃肠道恶性肿瘤端粒酶RNA表达及其与p53蛋白的相关性研究

目的 :探讨胃肠道恶性肿瘤中端粒酶RNA(hTR)表达意义及其与肿瘤抑制基因p5 3的相关性。方法 :采用Lightcycler实时逆转录荧光定量PCR方法定量检测胃肠道恶性肿瘤中hTR的表达 ;用免疫组织化学技术检测p5 3蛋白 ,比较hTR与p5 3表达间的关系。结果 :胃肠道恶性肿瘤组与正常组的配对t检验显示hTR的表达差异有显著性 (P <0 .0 5 )。p5 3阳性与p5 3阴性胃肠道恶性肿瘤组中hTR的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :胃肠道恶性肿瘤组织与正常组织的hTR表达有差异 ,表明定量检测hTR表达有助于胃肠道恶性肿瘤的早期诊断。hTR表达不直接受p5 3基因变化的影响 ,两者在胃肠道恶性肿瘤发生中存在各自不同的调控途径。

辛伐他汀联合全反式维甲酸诱导NB4细胞分化凋亡过程中apoM基因表达的变化

目的探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂辛伐他汀(SV)联合全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响,以及载脂蛋白M(apo M)基因的表达变化。方法以不同浓度辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞,取对数生长期各组细胞分别进行细胞形态观察;MTT法观察细胞增殖能力;流式细胞测定NB4细胞分化指标CD11b和细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;Real-time RT-PCR测定apoM基因表达。结果重复三次实验结果显示:15μmol/L SV,10μmol/L SV和5μmol/L SV单独处理NB4细胞,随着培养时间延长,细胞抑制率增加(F=7.15,P=0.000),CD11b的表达水平逐渐升高(F=3.41,P=0.014),AnnexinV表达水平逐渐增高(F=43.38,P=0.000),apo M基因表达水平逐渐增高(F=50.31,P=0.000),其中以15μmol/L SV组NB4细胞变化最明显。辛伐他汀和ATRA两药合用CD11b表达协同升高,具有明显交互作用(F=4.09,P=0.025)。ATRA处理NB4细胞后其apo M基因表达水平逐渐下降(F=46.05,P=0.000),而辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞后培养不同时间,apo M基因表达水平不如辛伐他汀和ATRA单药处理变化明显,15μmol/L SV联合ATRA处理NB4细胞72hapo M基因表达水平(32.87±3.60)较24h(24.73±1.78)升高(P<0.05),提示ATRA可以拮抗辛伐他汀引起NB4细胞apo M基因表达水平代偿性升高。结论辛伐他汀以剂量依赖方式体外抑制NB4细胞生长,诱导NB4细胞的分化,促进凋亡,升高apo M基因表达,而ATRA可以拮抗辛伐他汀引起apo M代偿性升高,两药具有协同治疗急性早幼粒细胞白血病的潜能。

载脂蛋白M对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞中相关炎性因子表达的抑制作用

目的观察高糖培养环境下人视网膜血管内皮细胞（HRECs）中载脂蛋白M（ApoM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的变化，探讨ApoM过表达对高糖诱导的HRECs中TNF-α和MCP-1表达的抑制作用。方法采用含体积分数10%胎牛血清（FBS）和5.5 mmol/L D-葡萄糖的DMEM培养基培养HRECs后分为6个组。正常对照组细胞进行常规培养，高糖组细胞用含30 mmol/L D-葡萄糖的高糖培养基进行培养，ApoM过表达组用载有ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞，空载组用无ApoM序列的慢病毒载体感染常规培养的细胞，空载＋高糖组用高糖培养基培养空载体感染的细胞，ApoM过表达＋高糖组用高糖培养基培养ApoM感染的细胞。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量；采用Western blot法检测细胞中ApoM蛋白相对表达量。结果实时荧光定量PCR法检测显示，高糖组细胞中ApoM、TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t＝5.517、3.295、2.555，均P〈0.05）。HRECs感染慢病毒后生长良好，ApoM过表达组细胞中ApoM mRNA相对表达量为236.400±39.270，明显高于空载组的1.000±0.153，差异有统计学意义（t＝5.995，P〈0.01），空载组细胞中未见ApoM蛋白表达条带，ApoM过表达组蛋白表达条带较强。正常培养基和高糖培养基培养后24 h，ApoM过表达组中ApoM蛋白相对表达量分别为1.000±0.249和2.978±0.285，差异有统计学意义（t＝5.056，P〈0.01）。空载组、空载＋高糖组、ApoM过表达组、ApoM过表达＋高糖组细胞中TNF-α和MCP-1 mRNA相对表达量的总体比较差异均有统计学意义（F＝5.966，P＝0.026；F＝14.410，P＝0.002），ApoM过表达＋高糖组细胞中TNF-α mRNA和MCP-1 mRNA相对表达量明显低于空载＋高糖组，差异均有统计学意义（P＝0.017、0.004）。 结论高糖培养早期可上调HRECs中ApoM、MCP-1和TNF-α的表达，过表达ApoM能够抑制高糖诱导的MCP-1和TNF-α表达的上调。

不同时间的缺血预处理对脂肪肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨缺血预处理(IP)对脂肪肝缺血再灌注(IR)损伤的保护作用,以及取得最佳效果的预处理时间。方法通过建立大鼠脂肪肝模型,给予不同时间的IP(5-10、8-10、10-10、15-10 min)和IR(缺血30 min,再灌注30 min),检测血清AST、ALT、LDH及NO水平,肝组织中MDA、SOD、MPO含量的变化和肝脏病理学变化。以脂肪肝未行IP组和正常肝脏未行IP组及正常肝脏行10-10 min IP作对照。结果 IR后,脂肪肝未行IP组血清肝功能的变化、肝组织病理学改变及炎性浸润程度显著重于正常肝脏未行IP组。在脂肪肝组中,5或8-10 min IP组血清学及肝组织MDA、MPO水平低于其余组和未行IP组,而其SOD水平显著升高(P<0.05)。各IP组中的NO水平明显高于其对应的IR组(P<0.05)。脂肪肝IP组中,5或8-10 min IP组血清NO水平明显高于其余组(P<0.05)。结论脂肪变性加重肝脏IR损伤,IP对脂肪肝的IR损伤具有保护作用,本实验认为5～8 min缺血和10 min再灌注的IP方案可能是中重度脂肪肝时的最佳预处理方案。