血清has_circ_0000400在结肠癌中的表达及生物学功能研究

目的分析血清has_circ_0000400在结肠癌中的表达水平及生物学功能,通过检测结肠癌患者血清has_circ_0000400表达量,通过生物信息学方法分析其作用机制,探讨has_circ_0000400作为结肠癌肿瘤标志物的可能性。方法选取2018年1月至2020年10月常熟市第二人民医院普外科收治的78例结肠癌患者作为结肠癌组,另随机选取2020年9月于常熟市古里人民医院参加健康体检的78例健康体检者作为对照组。两组均采用实时定量反转录聚合酶链反应技术检测血清中has_circ_0000400相对表达水平,并结合患者相关临床病理特征综合分析,培养结肠癌标准细胞株SW480、LOVO、HT-29与正常人结肠黏膜上皮细胞株HCoEpiC对结果验证。通过生物信息学软件预测has_circ_0000400的靶向基因,并进一步预测miRNA的靶向蛋白。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清has_circ_0000400、糖类抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)及联合检测对结肠癌的诊断价值。结果结肠癌组血清has_circ_0000400相对表达量、CA19-9水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移患者血清has_circ_0000400表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。平板克隆形成实验以接种100个细胞为模型,培养1周后,沉默has_circ_0000400后的SW480细胞的克隆形成率为54.28%,正常SW480细胞的克隆形成率为21.44%,侵袭实验显示沉默SW480细胞后结肠癌细胞侵袭能力显著下降。蛋白质免疫印记实验显示,has_circ_0000400负调控EBF3,侵袭实验显示过表达EBF3后,细胞增殖能力与侵袭能力显著下降。CCK8增殖实验显示,过表达EBF3的SW480细胞增殖能力显著下降。结论血清hsa_circ_0000400可作为结肠癌新的参考标志物,与CA19-9联合检测诊断结肠癌更为准确,但其具体分子机制仍需进一步探索。