PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用

为建立快速有效、经济适用的沙门氏菌血清型鉴定方法,利用Primer Plex软件设计畜禽中常见沙门氏菌的菌体(O)抗原和鞭毛抗原(H)的引物,优化引物比例和退火温度等反应条件,建立沙门氏菌血清型鉴定的PCR法,并对46株沙门氏菌分离株进行血清型鉴定,同时与传统玻片凝集法和美国CDC的液相芯片(Luminex-x MAP)法进行比较。优化后获得了O抗原中B、C1、D和E1群的多重PCR引物,以及鞭毛抗原H1相抗原基因(fli C)和H2相抗原基因(flj B)的2对引物;建立了一套基于沙门氏菌O和H抗原的多重PCR血清型鉴定法;PCR法和Luminex-x MAP法鉴定出7种沙门氏菌血清型,传统玻片凝集法鉴定出6种血清型;PCR法与传统玻片凝集法和Luminex-x MAP鉴定结果的符合率均为95.65%。本研究建立的PCR沙门氏菌血清型鉴定法简便、快速,预期可在沙门氏菌的血清分型研究中发挥作用。

猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性及MCR-1耐药基因检测

为了解猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性以及MCR-1基因的流行情况,选取2008年-2015年采集的18 203株大肠埃希菌和2009年-2015年采集的1 729株沙门菌为研究对象,使用WPS Office 2016软件对菌株的MIC值分布和耐药结果进行统计分析,用PCR对部分菌株进行MCR-1基因检测。统计发现,在MIC≥4μg/mL时,大肠埃希菌和沙门菌所占比例分别为17.97%和29.38%;而EUCAST的结果分别为1.84%和5.63%,在耐药浓度范围内,大肠埃希菌和沙门菌均在MIC值为4μg/mL时所占比例最高,分别为15.93%和21.86%。自2013年两种菌开始出现MIC>16μg/mL的菌株。大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药率分别为17.97%和29.38%,猪禽源大肠埃希菌和沙门菌耐药率分别为24.25%、12.3%和17.26%、38.94%。MCR-1基因检出率为11.73%,大肠埃希菌检出率比沙门菌高15.39%,MIC值为4μg/mL时阳性菌株分布最多(72.18%),2008年-2015年阳性菌株比例分别为0.19%、5.26%、4.68%、30.99%、12.28%、12.67%、14.81%、19.10%。大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素耐药率相对不高,多数为MIC=4μg/mL的低水平耐药且逐渐出现了MIC>16μg/mL的高水平耐药菌,与EUCAST相比,其MIC值分布相对后移。沙门菌对黏菌素的耐药率高于大肠埃希菌,但后者耐药日趋严重,不同动物源菌株对黏菌素的耐药程度存在差异,猪源大肠埃希菌和禽源沙门菌耐药程度相对严重。MCR-1检出率较低,但呈现增长趋势,该基因主要引起MIC=4μg/mL的低水平耐药且主要在大肠埃希菌中被检出。