circ_100284通过miR-217/MAPK1调控食管鳞状细胞癌侵袭及其对5-FU化疗敏感性的影响

目的 探究环状RNA(circ_100284)作为竞争性内源RNA(ceRNA)通过调控miR-217/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗的敏感性。方法 生物信息学分析ESCC中差异表达的circRNAs。qRT-PCR检测ESCC组织和细胞中circ_100284的表达。使用浓度逐渐增加的5-FU处理ESCC细胞KYSE450以建立5-FU耐药KYSE450细胞系(KYSE450-R),MTT实验检测KYSE450和KYSE450-R细胞的IC_(50)。qRT-PCR检测KYSE450和KYSE450-R细胞中circ_100284、miR-217和MAPK1 mRNA的表达,Western blotting检测MAPK1蛋白的表达。取KYSE450-R细胞,设置:(1)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_100284组(转染si-circ_100284)、pc-Control组(转染pc-Control)、pc-circ_100284组(转染pc-circ_100284)、pc-circ_100284+mimic NC组(转染pc-circ_100284和mimicNC)与pc-circ_100284+miR-217mimic组(转染pc-circ_100284和miR-217mimic),采用MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-MAPK1的阴性对照)、si-MAPK1组(转染si-MAPK1)、si-MAPK1+inhibitor NC组(转染si-MAPK1和inhibitor NC)与si-MAPK1+miR-217inhibitor组(转染si-MAPK1和miR-217 inhibitor),采用qRT-PCR和Western blotting检测MAPK1 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。将circ_100284-WT或circ_100284-MUT报告质粒、MAPK1-WT或MAPK1-MUT报告质粒分别与miR-NC或miR-217 mimic共转染KYSE450-R细胞48 h,采用双荧光素酶报告实验测定荧光素酶相对活性。结果 生物信息学分析显示circ_100284在ESCC中呈高表达。与癌旁正常组织比较,ESCC组织中circ_100284表达明显增加(P<0.05);与健康人食管上皮细胞HEEC比较,ESCC细胞系TE-11、ECA09和KYSE450中circ_100284表达明显增加(P<0.05)。与KYSE450细胞比较,KYSE450-R细胞的IC_(50)增加,circ_100284、MAPK1表达增加但miR-217表达被抑制(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_100284组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05)。与pc-Control组比较,pc-circ_100284组细胞活力和细胞侵袭数增加,细胞凋亡率降低(P<0.05),而pc-circ_100284对ESCC细胞恶性生物学行为的影响被miR-217过表达逆转(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MAPK1组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P<0.05),而si-MAPK1对ESCC细胞生物学行为的影响被miR-217 inhibitor逆转(P<0.05)。circ_100284与miR-217、miR-217与MAPK1具有靶向关系。结论 circ_100284通过调控miR-217/MAPK1进而增强ESCC细胞的侵袭能力,抑制ESCC细胞对5-FU化疗的敏感性,在ESCC中发挥促癌因子的作用。