连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

目的采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组(剂量为400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(剂量为400、600、800μg/mL),分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型,采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异,并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组(400、600、800μg/mL)和连翘配方颗粒处理组(400、600、800μg/mL),采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型,通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL)和连翘配方颗粒处理组(1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL),采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果与模型对照组比较,连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量(P<0.001)和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达(P<0.05或P<0.01或P<0.001),升高斑马鱼的存活率(P<0.01或P<0.001);减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集(P<0.05或P<0.01或P<0.001);并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用,两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的mRNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外,其他作用均无明显差异。

基于标准汤剂的鲜益母草配方颗粒质量标准研究

建立基于标准汤剂的鲜益母草配方颗粒质量标准。采集20批鲜益母草药材,依据《医疗机构中药煎药室管理规范》和《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》进行饮片炮制、煎煮、浓缩、冷冻干燥,制备成鲜益母草标准汤剂,测定20批鲜益母草标准汤剂的出膏率、盐酸益母草碱和盐酸水苏碱的含量,并构建表征鲜益母草主要化学成分的特征图谱。同时,以与鲜益母草标准汤剂出膏率、指标成分的含量及特征图谱的一致性为基准,进行3批鲜益母草配方颗粒的放大生产,验证制定的鲜益母草配方颗粒质量标准的合理性。结果表明20批鲜益母草标准汤剂出膏率范围为4.43%~8.02%;盐酸益母草碱与盐酸水苏碱含量分别为2.11~9.05、16.86~82.59 mg/g;确定配方颗粒干浸膏范围为5.0%~8.5%,盐酸益母草碱与盐酸水苏碱含量分别为1.0~5.3、9.0~60.0 mg/g;特征图谱标定8个特征峰,配方颗粒图谱信息与标准汤剂一致。可知本研究基于标准汤剂的鲜益母草配方颗粒质量标准合理可行,可为鲜益母草配方颗粒国家标准的制定提供参考。

凤尾草配方颗粒4个成分含量同时测定及其总黄酮提取工艺优化

目的建立一测多评法同时测定凤尾草配方颗粒中4个成分,并优化其总黄酮提取工艺。方法采用(超高效液相色谱)UPLC法,以野漆树苷为内标物,建立一测多评(Quantitative analysis of multicompounds by single-marker,QAMS)法计算凤尾草配方颗粒中忍冬苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子,考察其耐用性。采用外标法测定凤尾草配方颗粒中4个成分含量,比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异。通过单因素实验研究超声时间、乙醇体积分数、料液比、超声功率对凤尾草配方颗粒总黄酮提取率的影响。在此基础上,进行3因素3水平的Box-Behnken实验,优化总黄酮的提取工艺,并进行验证实验。结果7批凤尾草配方颗粒中野漆树苷的含量范围为0.035%-0.056%,忍冬苷、木犀草素、芹菜素的QAMS法含量测定结果范围分别为0.085%-0.167%、0.014%-0.028%、0.004%-0.008%,均与外标法测定结果无显著差异。总黄酮的最佳提取条件为以80%乙醇水、料液比1:20、超声提取40 min,平均提取率为24.46 mg·g^(-1)。结论建立的一测多评法准确可行,基于Box-Behnken响应面法优选的总黄酮提取工艺简单可行,可为凤尾草配方颗粒的质量评价提供参考。

板蓝根配方颗粒喷雾干燥工艺优化研究

目的基于质量源于设计(QbD)理念,优化板蓝根配方颗粒喷雾干燥工艺。方法结合信息熵赋值法,以喷干粉得粉率及尿苷、腺苷、鸟苷和(R,S)-告依春含量作为关键质量属性(CQAs),利用Plackett-Burman试验设计对进风温度、雾化压力、药液温度、进液速度和药液相对密度进行考察,筛选出关键工艺参数(CPPs),再运用中心点复合设计(Center Point Composite design,CCD)试验对筛出的CPPs进行优化,在二次多项式回归模型的基础上建立板蓝根配方颗粒喷雾干燥工艺设计空间,并加以验证。结果Plackett-Burman试验结果显示,药液相对密度和进液速度为该研究的关键工艺参数。CCD试验方差分析结果显示构建的模型具有显著性差异(P<0.01),失拟项不显著(P>0.05),表明模型预测能力良好。构建的CPPs优化设计空间为药液相对密度1.05-1.08,进液速度30%-40%。结论基于QbD理念建立的板蓝根配方颗粒喷雾干燥工艺设计空间,可提高其工艺的稳定性,有利于保障产品质量的一致性。

经典名方麦门冬汤指纹图谱和多指标成分含量测定研究

目的建立麦门冬汤基准样品的指纹图谱并结合化学模式识别法进行评价,同时建立多指标成分含量测定方法。方法采用超高效液相色谱-蒸发光散射检测器(UPLC-ELSD)和UPLC-二极管阵列检测器(PDA)建立麦门冬汤的指纹图谱,明确共有峰归属并进行相似度分析、聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析等化学模式识别研究。测定样品中10种指标性成分的质量分数。结果建立麦门冬汤基准样品2套指纹图谱方法,相似度均大于0.90,标定了24个共有峰,分别来自方中麦冬、甘草、人参3个药味;化学模式识别法将20批样品分为5类,筛选出影响不同批次基准样品质量差异的5种关键成分;甲基麦冬二氢高异黄酮A和甲基麦冬二氢高异黄酮B、麦冬皂苷D和麦冬皂苷C、麦冬龙脑苷、人参皂苷Rg1和人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草苷、甘草酸质量分数均值的±30%范围分别为0.001%~0.003%、0.002%~0.004%、0.003%~0.005%、0.04%~0.08%、0.02%~0.03%、0.08%~0.16%、0.06%~0.11%。结论建立的麦门冬汤基准样品质量分析方法科学、准确且稳定,可为经典名方麦门冬汤相关制剂的开发研究及其质量控制提供参考依据。

不同产地加工方式对桔梗质量的影响

目的:研究不同产地加工方式对桔梗质量的影响。方法:采用高效液相色谱法建立带皮桔梗、去皮桔梗、带皮桔梗鲜切片、去皮桔梗鲜切片的指纹图谱,测定桔梗皂苷D含量;采用分光测色仪采集各样品粉末的色度值;以指纹图谱、桔梗皂苷D含量、色度值、总灰分及重金属含量为指标,采用单因素方差分析、聚类分析和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)比较带皮桔梗、去皮桔梗、带皮桔梗鲜切片、去皮桔梗鲜切片的质量差异;分析带皮桔梗和去皮桔梗干燥过程中水分和指纹图谱的变化规律。结果:单因素方差分析结果表明,带皮桔梗中桔梗皂苷D含量明显高于去皮桔梗、带皮桔梗鲜切片和去皮桔梗鲜切片(P<0.05);聚类分析结果显示,带皮桔梗明显区别于去皮桔梗、带皮桔梗鲜切片、去皮桔梗鲜切片;OPLS-DA结果显示,砷、汞、铅3种重金属的含量,峰5(桔梗皂苷D)~峰7的单位峰面积,总灰分是带皮桔梗、去皮桔梗、带皮桔梗鲜切片、去皮桔梗鲜切片的主要差异性指标(变量重要性投影值>1)。带皮桔梗与去皮桔梗干燥过程中,化学成分的变化规律存在差异,带皮桔梗的峰1~峰3的单位峰面积整体呈先降后升趋势;去皮桔梗的峰1、峰3单位峰面积整体呈先降再升再降趋势,峰2单位峰面积整体呈先升再降再升趋势;带皮桔梗与去皮桔梗峰4~峰7单位峰面积整体呈上升趋势。结论:不同产地加工方式桔梗质量存在明显差异。

龟甲配方颗粒的高分辨熔解曲线技术鉴别研究

目的建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法。方法根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证。结果在模板DNA质量浓度为0.62~374.88 ng/μL、引物浓度为0.1~0.4μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增。结论该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据。

醋龟甲配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:建立一种醋龟甲配方颗粒特异性位点聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据乌龟Chinemys reevesii(Gray)及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列上的单核苷酸多态性位点设计醋龟甲的特异性鉴别引物,经过优化反应体系,确定最佳的PCR反应条件,并对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:当退火温度为62℃、循环数为34时,醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒均可在约92 bp处得到清晰单一的特异性条带,其混伪品及阴性对照均无条带。结论:建立的位点特异性PCR鉴别方法可快速、准确地鉴别醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒的真伪,为醋龟甲配方颗粒质量标准研究提供了参考。

一测多评法同时测定小蓟配方颗粒中5种成分

建立一测多评(QAMS)法同时测定小蓟配方颗粒中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁5种成分的含量。采用高效液相色谱法测定小蓟配方颗粒中5种成分,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,流量为0.8 mL/min,柱温为25℃,检测波长为340 nm,进样体积为10μL。5种成分的质量浓度与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均为0.999 9,加标平均回收率分别为94.22%、98.58%、100.98%、99.96%、95.23%,测定结果的相对标准偏差均小于1.00%(n=6)。以绿原酸为内参物,建立其与新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和芦丁的相对校正因子,相对校正因子分别为1.153、1.014、0.783、1.516。将一测多评法计算结果与外标法测定结果进行对比,两种方法对10批小蓟配方颗粒的测定结果均无明显差异,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和芦丁测定结果的相对偏差均小于2%。建立的一测多评法测定结果准确可靠,可用于小蓟配方颗粒5种成分的同时测定及质量控制。

基于专利视角的经典名方研究分析

目的 分析《古代经典名方目录(第一批)》100首经典名方相关专利申请情况,为经典名方研发和保护提供参考。方法 检索incoPat数据库1800年1月1日-2022年7月14日《古代经典名方目录(第一批)》中100首经典名方相关专利,从专利申请量、申请人、法律状态、专利主题等方面进行分析。结果 纳入专利471件,以发明专利为主(465件),专利申请量在2021年达到峰值,62%的专利申请人为企业。在全部专利申请中,包括有效专利94件;在授权专利中,主题类型是质控/检测方法的专利最多(51件,54.3%)。结论 目前我国经典名方的专利保护情况有专利申请量少且授权率低、专利申请主体以企业为主、专利主题类型单一等特点;研究者可对经典名方药效物质及其作用机制、现代生产工艺及古今制剂质效一致性等研究过程中产生的创新性研发成果申请专利保护。

乌梢蛇配方颗粒与常见三种伪品的多重PCR鉴别研究

目的:建立乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇药材及水提物四重位点特异性聚合酶链反应(PCR)鉴别方法,为配方颗粒的掺伪鉴别提供依据。方法:以线粒体细胞色素C氧化酶1号(CO1)基因为靶基因,设计特异性引物,优化引物最适退火温度、循环次数、聚合酶种类,并用该方法进行混合样品的检测。结果:乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇聚合酶为Multiplex PCR 5×Master Mix,退火温度为60℃,循环次数为35次时分别扩增出133、180、247、197 bp的特异性条带,空白对照无条带。该方法能同时、准确地鉴定出混合样品的蛇源成分。结论:本方法可同时、准确、快速地鉴定乌梢蛇、王锦蛇、百花锦蛇、灰鼠蛇样品,并适合标准汤剂和配方颗粒样品鉴别。

牵牛子配方颗粒多指标成分含量测定方法研究

目的:建立牵牛子配方颗粒中多指标成分的含量测定方法。方法:采用HPLC结合一测多评法同时测定绿原酸等酚酸类成分的含量。色谱条件为采用AgilentZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5.0μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,检测波长为326nm,流速为1.0mL·min^(-1),柱温为30℃,进行梯度洗脱。建立一测多评法,以咖啡酸为内参物测定牵牛子配方颗粒中酚酸类成分的含量。同时采用外标法验证本研究建立的测定方法测定结果的准确性。结果:在各自线性范围内,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的相对校正因子分别为1.841、1.718、1.885、1.485、1.268、1.429;一测多评法与外标法测定结果差异不显著。结论:建立的一测多评法可准确地检测牵牛子配方颗粒酚酸类多指标成分含量,作用于牵牛子配方颗粒的质量控制。

制药企业业财融合中存在的问题及应对举措

随着经济全球化的不断发展,企业所面对的竞争环境越来越激烈,经营管理难度也越来越大。外部环境的不断变化要求企业必须通过不断的创新和发展来适应市场的潮流,不断地精耕细作,完善自己的内部管理,从而提升价值链运行效率,为企业带来外部竞争优势,业财融合的管理模式作为制药企业管理的重要手段应运而生。在信息技术飞速发展的今天,大数据、云计算等都在不断地更新迭代,为实现业财数据的整合和有效实现业财融合提供技术基础。本文就制药企业如何在大数据环境下顺利地实现转型提出探讨。

白术药材UPLC特征图谱方法构建及模式识别研究

目的:以有机酸类物质为指标建立白术药材的超高效液相色谱指纹图谱测定方法,并结合聚类分析及主成分分析法(PCA)评价不同产地的白术药材质量。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为50 mm,内径为2.1 mm,粒径为1.7μm),以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min;检测波长为325 nm。指纹图谱采用中药色谱指纹图谱相似度评价(2012版)软件,对不同产地的白术UPLC指纹图谱进行分析,并运用SPSS软件对指纹图谱进行统计分析。结果:指纹图谱共标定了9个峰作为共有峰,并指认其中7个共有峰,分别为绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C,15批白术药材相似度均大于0.8。聚类分析将15批白术分为5类,PCA结果表明,前2个主成分的累积贡献率达到81.72%,选择这2个主成分因子即可对白术药材进行综合评价。根据综合得分可知,来自安徽亳州和河北安国产地的白术药材中有机酸类成分占比更大,其质量可能更佳。结论:以有机酸类物质为指标建立的UPLC方法简单、可靠,精密度、稳定性、重复性良好,结合PCA可以快速、客观地评价不同产地白术药材的质量差异,为白术水提制剂的质量评价研究奠定基础。

一测多评法同时测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分

目的建立一测多评(QAMS)法测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分的含量,并验证其准确性及可行性。方法采用UPLC法,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^(-1);检测波长为325 nm。以绿原酸为内参物,计算新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的相对校正因子(?)。同时采用外标法和QAMS法测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分的含量,比较2种方法的测定结果是否存在差异。结果新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.999);?分别为1.00、0.94、1.20、1.25、1.16。QAMS法与外标法测得13批样品中6个酚酸类成分的含量结果无显著差异,相对误差均小于1.2%。结论建立的QAMS法测定结果准确,可用于艾叶配方颗粒的定量分析及质量控制。

不同干燥方法对桑叶主要成分和芦丁含量的影响

目的研究阴干、晒干、烘干3种不同干燥方法对桑叶化学成分的影响,为桑叶的采收加工提供参考。方法测定桑叶中芦丁的含量和特征图谱,通过相似度评价、方差分析和熵权TOPSIS法对不同方法干燥的桑叶进行一致性和差异性研究。结果在采集的特征图谱中,不同方法干燥的桑叶确定了7个共有峰,指认1、3、6号峰分别为新绿原酸、隐绿原酸、芦丁;相似度分析结果显示不同方法干燥的桑叶相似度均大于0.95,方差分析结果表明方法干燥的桑叶7个共有峰含量差异无统计学意义;熵权TOPSIS法分析显示不同方法干燥的桑叶Ci值存在差异,晒干的Ci值整体优于阴干和烘干,烘干的Ci值浮动较大,阴干的Ci值则整体偏低,提示晒干桑叶质量整体稳定且优于阴干和烘干桑叶。含量测定结果显示晒干桑叶的芦丁含量整体高于阴干和烘干桑叶,与熵权TOPSIS法分析一致。结论该方法稳定性及重复性较好,可用于评价不同干燥方法对桑叶化学成分的影响。

经典名方麦门冬汤化学成分的UPLC-Q-Orbitrap-MS分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-静电轨道阱-高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对麦门冬汤的化学成分进行快速分析和鉴定。方法 采用Waters CORTECS T3 C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min。质谱采用ESI源,正负离子模式分别采集一级、二级质谱数据。结果 通过对照品指认、软件预测分析、结合文献报道、质谱裂解规律分析,从麦门冬汤中共鉴定出141个化学成分,包括黄酮及其苷类54个、高异黄酮类27个、三萜类40个、甾体皂苷类7个、苯丙素类7个和其他类6个。结论 采用UPLC-Q-Orbitrap-MS技术可以系统、快速地鉴定麦门冬汤全方的物质基础,为该复方进一步药效物质基础研究及质量控制的建立提供了实验依据。

鳖甲配方颗粒的位点特异性PCR鉴别研究

目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据中华鳖Trionyx sinensis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R。通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证。结果:当退火温度为60℃,循环33次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带。结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据。

多重位点特异性PCR法同时鉴别牛膝和川牛膝配方颗粒

目的建立一种同时鉴别牛膝和川牛膝药材及配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。方法通过比较牛膝属相近物种核基因ITS序列,设计牛膝和川牛膝的特异性引物,经过优化PCR反应体系及PCR反应条件,建立了牛膝和川牛膝配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。结果在退火温度为58℃、循环次数为31时,牛膝和川牛膝配方颗粒分别可扩增出187 bp和164 bp的特异性条带。该方法对牛膝和川牛膝药材的掺伪检出限分别为1%、5%,对两者配方颗粒的掺伪检出限分别为10%、50%。结论所建立的多重位点特异性PCR鉴别可有效鉴别牛膝和川牛膝配方颗粒及其掺伪体系。

一测多评法同时测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分

目的建立一测多评法测定丹参配方颗粒中丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量,验证其准确性及可行性。方法采用HPLC法,色谱柱为Waters Xselect HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.2 mL·min^(-1);检测波长为286 nm。以原儿茶醛为内参物,计算其他6个成分的相对校正因子。同时采用外标法和一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分的含量,比较两种方法的测定结果是否存在差异。结果丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);相对校正因子分别为7.36、1.18、2.82、1.99、2.82、3.31。一测多评法与外标法测得12批样品中7个酚酸类成分的含量结果无显著差异,丹参素、咖啡酸、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B相对误差分别在0.43%~0.53%、0.00%~3.70%、0.00%~0.34%、1.71%~2.01%、2.53%~2.93%、1.69%~1.73%。结论建立的一测多评法测定丹参配方颗粒中7个酚酸类成分简便稳定,可用于丹参配方颗粒的定量分析及质量控制。