用PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的突变

目的 了解本地区结核分枝杆菌对利福平 (RFP)耐药基因的突变情况 ,探讨利用分子生物学方法直接快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的试验方法。方法 针对rpoB基因设计一对引物 (扩增产物为 189bp) ,采用聚合链酶反应 单链构象多态性银染 (PCR SSCP)方法 ,以标准结核分枝杆菌H38Rv为对照 ,检测临床分离的35株结核分枝杆菌rpoB基因突变情况并以药敏试验结果做对照分析。结果 以药敏试验结果为对照 ,35株临床分离株中有 9株RFP敏感株的SSCP带与结核分枝杆菌标准株 (H37Rv)相同 ,2 6株RFP耐药株中有 2 4检测到突变图谱 ,与药敏试验结果对照阳性率为 92 .3% ,特异性为 10 0 %。结论 RpoB基因是一种高度保守序列 ,结核分枝杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致。本研究针对其高突变区域设计一对引物 ,运用PCR SSCP法具有简便、快速、准确的特点 ,可以对临床标本中结核分枝杆菌进行检测 。