《遗传与优生》课程多元化教学模式的探索与实践

通过对《遗传与优生》课程教学内容的整合、教学方法的改革,综合运用以案例为基础的教学、以问题为基础的教学、基于网络的知识拓展、开设综合性实验等措施,对教学模式的优化进行了探索,建立了《遗传与优生》课程的多元化教学模式。

用流式细胞仪进行人核迁移蛋白shRNA有效干扰片段的分析和筛选

目的为了更好地利用流式细胞仪筛选出有效的RNA干扰片段,构建了一系列真核表达载体pDs-NUDC-RFP-TK-U6-shNUDC-A、B、C、D、E、F、H。方法将NUDC-RFP融合基因克隆至pDs载体中,构建出pDs-NUDC-RFP.载体;将人U6启动子克隆至pDs-NUDC-RFP.载体中;将shNUDC-A、B、C、D、E、F、H各个片段分别克隆至含有U6启动子的载体中,形成一系列RNA干扰载体pDs-NUDC-RFP-TK-U6-shNUDC-A、B、C、D、E、F、H;将提取高质量的质粒通过脂质体方法转染293T细胞。用流式细胞仪分析转染的293T细胞的荧光强度和荧光细胞数量,用实时荧光相对定量RT-PCR(real-time PCR)检测NUDC-RFP mRNA的转录情况,用Western Blot法检测NUDC-RFP融合蛋白的表达水平。结果流式细胞仪检测结果显示:空白对照组的293T细胞无发光细胞;阴性对照组的293T细胞能正常发光,且发光细胞数量较多;实验组的293T细胞发光细胞数量少,荧光强度低,说明其能有效干扰NUDC-RFP融合基因的表达,pDs-NUDC-RFP-TK-U6-shNUDC-F干扰下调效果约90%左右;pDs-NUDC-RFP-TK-U6-shNUDC-A可干扰hNUDC-RFP融合基因的表达,下调效果约85%左右;其他干扰片段pDs-NUDC-RFP-TK-U6-shNUDC-B、C、D、E、H下调效果在62%～75%;阴性对照组对融合基因无干扰效果;流式细胞仪检测结果与real-time PCR检测结果一致,也与Western Blot法的鉴定结果基本符合,并确定了shNUDC-F为RNA干扰效果最佳的干扰片段。结论流式细胞仪分析方法是一种有效的带荧光标记的RNA干扰载体的筛选方法,为后期研究打下了基础。

垂体腺苷酸环化酶激活肽与其衍生肽对小鼠淋巴细胞活性作用的比较

目的比较垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)及含蛋白转导域的重组PACAP(PACAP-PTD)对小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞的保护作用。方法利用地塞米松建立并筛选体外淋巴细胞损伤模型;设置空白对照组、Con A刺激对照组、Con A+地塞米松组、Con A+地塞米松+PACAP-PTD组和Con A+地塞米松+PACAP组,新型细胞增殖及细胞毒性检测试剂(CCK8)比色法及Annexin V-FITC/PI流式双染检测PACAP-PTD与PACAP对损伤的胸腺和脾脏淋巴细胞活性的作用。结果 PACAP-PTD及PACAP加药组淋巴细胞存活率比对照组显著升高(P<0.05),凋亡率显著下降(P<0.05)。结论 PACAP-PTD及PACAP对胸腺和脾脏淋巴细胞均具有促进增殖和抑制凋亡的作用,且PACAP-PTD的效果比PACAP更为明显。