生物化学与分子生物学教学提高型重点实验室建设

该文阐述了生物化学与分子生物学教学提高型重点实验室的建设和运行情况,指出建设教学提高型重点实验室是优化资源配置,加强师资队伍建设,提高实验教学质量,实现教学和科研并进的正确举措。

我院生物化学与分子生物学重点学科的建设与成效

阐述了广东医学院生物化学与分子生物学重点学科的建设情况与成效,指出规范学科管理制度,明确学科研究方向,培养高素质的学科人才,加强实验室建设是该学科实施重点学科建设的关键。

Survivin shRNA真核表达载体的构建及其生物学作用

目的:构建存活素(survivin)基因短发夹RNA(shR-NA)的表达质粒,为乳腺癌RNAi介导的基因治疗打下基础.方法:设计并合成有小发夹结构的8条survivinshRNA对应模板序列,退火并与pShuttle 1.0-CMV载体重组质粒;将重组质粒转染人乳腺癌细胞MCF-7;MTT实验筛选出最有效质粒及其有效浓度,流式细胞术检测细胞周期的变化,经Hoechst染色观察凋亡情况,RT-PCR和Western Blot检测survivin基因的表达情况.结果:成功构建重组质粒并筛选出最有效质粒及其有效浓度;细胞受阻于G2/M期,并通过荧光染色发现有凋亡细胞;survivin基因表达受到抑制.结论:构建的重组质粒能抑制survivin基因的表达,这为研究乳腺癌RNAi介导的基因治疗打下基础.

携带人生存素基因短发夹RNA表达载体重组腺病毒的构建及其生物学作用

目的构建携带人生存素(survivin)基因短发夹RNA(shRNA)表达载体的重组腺病毒。方法构建并筛选重组质粒pShuttles-urvivin,将其与腺病毒骨架质粒共转染HEK-293细胞,经同源重组产生腺病毒;PCR鉴定并测定病毒滴度;β-半乳糖染色检测病毒对人乳腺癌细胞MCF-7的感染效率;流式细胞术、RT-PCR和W estern免疫印迹法检测其生物学功能。结果经PCR鉴定重组腺病毒构建成功;48 h后感染率达75%以上;腺病毒感染MCF-7细胞后48 h,生存素mRNA和蛋白的表达均受到抑制;腺病毒感染MCF-7细胞后,细胞分裂受阻于G2/M期,在48和72 h有凋亡峰出现。结论成功构建人生存素基因shRNA表达载体的重组腺病毒。

蛋白激酶CK2的神经生物学功能

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的多功能 ,丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶具有高度保守性。CK2全酶由两个催化亚基 (α和 /或α′亚基 )和两个调节亚基 β所构成。α/α′亚基具有催化活性 ,β亚基主要稳定及调节CK2的活性。CK2大量存在于大脑 ,而且集中分布于神经元及其突触 ,在突触形成、突触传递、信息传递和储存、生长、发育及神经元形态发生等方面发挥着重要作用 ;CK2对海马神经细胞具有营养刺激活性 ,其磷酸化作用与大脑的记忆功能有关 ;CK2可能在某些神经系统特异性病变 (如阿尔茨海默病 )

乙酰转移酶MYST家族的生物学功能

组蛋白乙酰化是表观遗传修饰的重要方式,主要受到组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)催化.MYST是人类HATs的4大家族之一,包括MOF(males absent on the first),TIP60(tat interacting protein 60 kD),结合ORC1的组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase binding to ORC1,HBO1),单核细胞白血病锌指蛋白(monocytic leukemia zinc finger protein,MOZ)和MOZ相关蛋白(MOZ related factor,MORF)等,均具有典型的MYST结构域.MYST介导的乙酰化是重要的翻译后修饰,其催化底物包括组蛋白和非组蛋白,如组蛋白H3,H4,H2A,H2A突变体,以及许多参与DNA代谢、细胞增殖和发育调控的蛋白因子.MYST蛋白家族参与许多细胞的生理过程,本文主要综述其在调节基因转录、DNA损伤修复和肿瘤发生发展等方面的生物学功能.

9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析

目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。

广东汉人血管紧张素Ⅱ1型受体基因A-C1166多态性与原发性高血压、冠心病的关系

目的 :了解血管紧张素 受体 1 (AT1 R)基因 3’端非翻译区 (3′- UTR) A- C1 1 66多态性在广东人群中的分布特点及其与该人群患原发性高血压 (EH)和冠心病 (CAD)的关系。方法 :用 PCR和限制性内切酶酶切技术分析了 1 86例广东汉族大学生、68例 EH患者和 72例 CAD患者 AT1 R基因 A- C1 1 66多态性的基因型和等位基因频率。结果 :该人群A- C 1 1 66基因多态性明显不同于白人 ,与中国北方汉人相似。健康组中没发现 CC型纯合子 ,疾病组中仅 1例 EH患者和1例 CAD的患者为 CC基因型。C 1 1 66等位基因频率 0 .0 4 ,A 1 1 66等位基因频率为 0 .96。疾病组与健康组之间差异无显著性。结论 :AT1 R基因 A- C1 1 66多态性与广东汉族人患 EH和 CAD无关。

非环式维甲酸类化学预防肝癌的研究进展

动物实验及临床研究均证实非环式维甲酸类(AR)可用于肝癌的化学预防及治疗,尤其是应用于预防原发性肝癌根治术后二次肿瘤的复发。现对非环式维甲酸类的结构特性、预防肝癌的研究应用及其潜在的分子机制等作一综述。

利用siRNA阻抑survivin基因表达诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞凋亡的研究(英文)

背景与目的:survivin属IAP基因家族成员,表达于多种肿瘤组织中,能促使细胞逃避凋亡,并促进细胞的异常有丝分裂。本研究旨在探讨敲除survivin基因后,癌细胞的增殖和凋亡情况。方法:利用RNAi阻抑人乳腺癌细胞内survivin基因的表达,RT-PCR和Westernblot法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:survivinsiRNA转染组,survivin基因表达水平与未转染组比较下调了64%。随着siRNA浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,200nmol/L剂量组细胞增殖抑制率最高,可达60.9%。不同浓度的siRNA可不同程度地诱导细胞凋亡,200nmol/L剂量组凋亡率最高,可达29.0%。结论:survivinsiRNA有可能成为治疗乳腺癌的新药物。

翡翠贻贝提取物对小鼠抗疲劳作用的研究

为探讨翡翠贻贝提取物对小鼠的抗疲劳作用,采用不同浓度翡翠贻贝提取物(EME)溶液作为饮用水喂养实验小鼠,然后测定小鼠负重游泳时间、血尿素氮(BUN)和肝糖原等指标。结果显示,20g/L的EME即可明显延长小鼠负重游泳时间,降低小鼠血清尿素氮,提高小鼠肝糖原水平,表明翡翠贻贝提取物对小鼠有抗疲劳作用。

原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的 探讨原花青素(Procyanidins，PC)对β淀粉样肽25～35(β amyloid peptide25-35，Aβ25-35)诱导PCI2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-P1荧光染色法检测凋亡，RT-PCR检测P53和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测P53和Bcl-2蛋白表达。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩，凝聚和碎裂，降低P53 mRNA表达以及P53蛋白表达，增加bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。

白藜芦醇影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的实验研究

目的:研究白藜芦醇对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响。方法:以MTT法检测白藜芦醇对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的细胞毒作用;用Transwell小室法检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测白藜芦醇对HO-8910PM细胞粘附能力的影响。结果:白藜芦醇作用细胞6 h后能抑制HO-8910PM细胞体外趋化运动和粘附能力,其中100μmol/L抑制率分别为(30.1±10.8)%,(34.27±1.28)%,但白藜芦醇并不影响HO-8910PM细胞侵袭人工基底膜能力。结论:白藜芦醇能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的运动和粘附能力,是潜在的抗肿瘤转移药物。

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞周期的影响及其作用机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO8910PM细胞周期的影响;Westernblot法分析NFκB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平。结果不同浓度的5F分别处理细胞24h后,对HO8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NFκB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平。结论5F对HO8910PM细胞周期的影响与NFκB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关。

NGF诱导PC12细胞分化的研究

动物实验表明 ,生理浓度的乙醇在脑发育过程中 ,不但可以影响神经细胞的数量 ,还可协同增强NGF诱导PC12细胞形态和功能上的分化 ,分化的PC12细胞具有与交感神经元相似的性状特征。用 10 0mmol/L乙醇和 5 0ng/mlNGF联合诱导可建立PC12细胞分化模型 ,为以神经细胞为研究对象的实验提供一种获得神经细胞的方法。