bcl-x_L短发夹状RNA诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡(英文)

背景与目的:实验证明bcl-xL 在鼻咽癌细胞株CNE-2Z 中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展、转移及治疗过程中产生耐药等方面发挥重要作用。本研究拟探讨bcl-xL 短发夹状RNA (shorthairpin RNA ,shRNA )诱导CNE-2Z 细胞凋亡的作用。方法:把表达bcl-xL shRNA 的重组质粒pm U6-RNAi转染到CNE-2Z细胞中,用荧光染色和流式细胞术等方法检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polym erase chain reaction,RT-PCR )检测bcl-xL、bcl-2、survivin和caspase-3的m RNA 表达水平;用W estern blot检测Bcl-xL、Caspase-3和P53的蛋白表达水平。结果:流式细胞术检测发现,pm U6-RNAi重组质粒作用24h 后,细胞出现明显的凋亡峰;H oechst33258单染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩和核断裂;RT-PCR 分析pm U6-RNAi重组质粒作用细胞后明显下调了bcl-xL、bcl-2和caspase-3的m RNA 表达水平, 对survivin 的m RNA 表达水平无影响;W estern blot分析pm U6-RNAi质粒作用细胞后明显下调了Bcl-xL、Caspase-3的蛋白表达水平,而大幅度上调了P53的蛋白表达水平。结论:bcl-xL shRNA 可诱导CNE-2Z 细胞凋亡;CNE-2Z 细胞的凋亡可能与bcl-2、caspase-3和p53有着密切的关系;质粒表达的bcl-xL shRNA

bi-1短发夹状RNA重组真核表达质粒对鼻咽癌和卵巢癌细胞增殖的影响

目的以真核表达质粒pmU6为基础,针对bi-1基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shR-NA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM、HO8910细胞株生长增殖的影响。方法人工合成bi-1寡核苷酸链,退火、定向克隆入pmU6载体中产生重组质粒,将重组质粒转染到细胞中,MTT比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果与未处理组相比,bi-1shR-NA对CNE-2Z、CNE-1、HO8910PM细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对HO8910细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论重组质粒能在细胞内表达shRNA,产生RNA干扰(RNA interference,RNAi)效应并特异性抑制靶细胞的生长增殖,为质粒介导的RNAi技术应用于鼻咽癌和卵巢癌的基因治疗提供一定的理论依据。

bcl-xL短发夹状RNA重组真核表达质粒对几种细胞增殖的影响

目的:以自行构建的真核表达质粒pmU6为基础,针对bcl-xL基因构建在细胞内表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒载体,并观察它们对CNE-2Z、MCF-7和ECV-304细胞株增殖的影响。方法:将两条合成的bcl-xL寡核苷酸链插入pmU6载体中产生pmU6-RNAi重组质粒,把重组质粒转染到细胞中,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果:bcl-xLshRNA对CNE-2Z细胞株的生长增殖有明显的抑制作用,而对MCF-7和ECV-304细胞株的生长增殖无明显抑制作用。结论:提示pmU6-RNAi重组体能在细胞内表达短发夹状RNA,产生了RNA干扰效应并抑制靶细胞的生长增殖。

一种质粒介导的RNAi系统的建立

目的 构建mU6启动子驱动的，在真核细胞内表达短发夹状RNA(short hairpin RNA，shRNA)的质粒载体；以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)为靶点观察该载体介导的RNAi效应。方法 从已知质粒中获取mU6启动子，经亚克隆后替换pcDNA3质粒中的CMV启动子，构建成pmU6质粒；设计并构建能表达针对GFP的shRNA的重组质粒，与表达GFP的质粒共转染细胞，用流式细胞仪检测GFP的表达水平。结果 表达shRNA的pmU6质粒载体转染细胞后抑制了细胞中GFP的表达，针对GFP基因不同位点的shRNA的RNAi效应差异很大。结论 pmU6质粒载体能介导RNAi效应，该载体可作为RNAi用于基因功能和基因治疗研究的有用工具。