胚胎造血干Sca-1^+细胞向肝细胞分化的研究

目的探讨胚胎造血干细胞抗原阳性(Sca-1^+)细胞亚群在合适的体外诱导体系下向肝细胞或肝细胞前体分化的可行性。方法免疫磁性分离法分离Sca-1^+细胞,相差显微镜观察细胞形态,RT-PCR法检测细胞白蛋白(ALB)、转甲状腺蛋白mRNA水平表达,免疫组织化学法检测AFP和CK8/18蛋白水平的表达,以及检测细胞糖原染色和尿素合成功能。结果免疫磁性分离法分离Sca-1^+细胞能达到(85.57±1.66)%的纯度(P<0.01),对分离前后细胞活力的影响小(P<0.05)。随着诱导分化时间延长,细胞形态明显向肝细胞变化,AFP表达消失、CK8/18蛋白表达升高,ALB、转甲状腺蛋白mRNA表达升高,且细胞糖原染色和尿素合成功能增强,逐渐向成熟肝细胞转化。结论免疫磁性分离法能够分离出较高纯度的胚胎造血干Sca-1^+细胞,并能够向肝脏细胞分化。

组织薄片法在人原代肝癌细胞培养中的应用

目的探讨组织薄片法在人原代肝癌细胞培养中的应用。方法分别运用组织薄片法和组织块法从人肝癌组织标本中分离培养原代肝癌细胞,分析两种方法培养成功率、细胞爬出时间、形态及GPC3的表达。结果薄片法培养成功率为66.67%,爬出细胞时间为(7.89±0.78)d,在培养第一代就能观察到形态规则的细胞且周围培养环境洁净;组织块法培养成功率为61.11%,爬出细胞时间为(7.56±0.73)d,在培养第二代能观察到形态规则的细胞。同时原代肝癌细胞和HepG2均能稳定表达GPC3。结论两种方法均能成功培养出原代肝癌细胞,但薄片法培养的细胞在形态及洁净程度上较组织块好,同时能稳定表达GPC3。

肝细胞生长因子与酸性成纤维细胞生长因子体外诱导胚胎肝干细胞抗原阳性细胞向肝细胞定向分化的研究

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）与酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）体外诱导胚胎肝干细胞抗原阳性（Sca-1^＋）细胞向肝细胞或肝细胞前体分化的可行性。方法免疫磁珠分离法分离Sca-1^＋细胞，相差显微镜观察细胞形态，（RT-PCR半定量逆转录聚合酶链反应）法检测细胞自蛋白（ALB）、转甲状腺蛋白mRNA水平表达；免疫组织化学法检测ALB、AFP和CKS／18蛋白水平的表达，以及检测细胞糖原染色和尿素合成功能。结果分离后Sca-1^＋细胞活力为（94．24±1．04）％，纯度为（85．57±1．66）％，回收率为（62．31±1．85）％。Sca-1^＋细胞经HGF和aFGF诱导分化后，细胞形态变成不规则，明显向肝细胞变化，AFP蛋白表达消失、ALB和CK8／18蛋白表达升高，ALB、转甲状腺蛋白mRNA表达升高，且细胞糖原染色和尿素合成功能增强，逐渐向成熟肝细胞转化。结论HGF与aFGF可在体外诱导胚胎肝Sca-1^＋细胞向肝细胞或肝细胞前体分化。