RNA干扰HPV E6下调eIF4E转录表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并影响细胞周期进程研究

目的探讨宫颈癌Hella细胞中干扰HPV E6对eIF4E表达的调控,探寻HPV E6促癌的新途径,为宫颈癌诊断和治疗提供新靶点。方法构建高效的靶向HPV18 E6的shRNA质粒(shE6)并测序,而后转染人宫颈癌Hela细胞,荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率。而后以Real-time PCR检测E6及eIF4E的mRNA水平,采用CCK-8法检测Hela细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期。结果测序结果显示成功构建shE6质粒。shE6-3转染人宫颈癌Hela细胞后48 h,E6及eIF4E mRNA表达的抑制率分别约为80%,76%。shE6-3对Hela细胞的增殖活性在48 h的抑制效果最明显,增殖抑制率约为21%;相对于NC组,shE6组G0/G1期细胞比例显著增高,而S期比例减少,G2/M期未见明显变化。结论 RNA干扰HPV E6能够下调eIF4E转录表达,抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并阻滞细胞周期于G0/G1期。eIF4E有望成为宫颈癌防治的潜在靶点。

Snail在大肠肿瘤组织中的表达及其意义

目的探讨Snail蛋白表达在大肠癌的发生发展中的作用及意义。方法用免疫组化方法检测145例大肠石蜡标本的Snail表达。病例包括大肠炎25例、腺瘤40例、腺癌40例、转移性腺癌40例。结果依大肠炎、腺瘤、腺癌、转移性腺癌的次序,Snail阳性表达率分别为16.0%、67.5%、75.0%、95.0%,其中大肠炎组分别与其他三组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);腺瘤组与腺癌组比较,差异无统计学意义(P>0.05);腺瘤组和腺癌组分别与转移性腺癌组比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。依Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ临床分期次序,Snail阳性表达率分别为50.0%、62.1%、93.1%、95.0%,经比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。直肠癌和结肠癌的Snail阳性表达率分别为100.0%和67.4%,经比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Snail阳性表达与性别、年龄、浸润深度、分化程度等无关。Snail阳性表达从大肠炎中诊断腺瘤的敏感性为67.5%,特异性为84.0%;从腺瘤中诊断腺癌的敏感性为85.0%,特异性为32.5%。结论 Snail在大肠黏膜演变成腺瘤和腺癌、从未转移性腺癌演变成转移性腺癌、从早期癌到晚期癌中表达显著升高,提示Snail可以促进大肠肿瘤的发生发展。

缺氧微环境下TRPC3促进U87MG胶质瘤细胞的增殖

目的:探讨缺氧微环境下瞬时感应性C通道3(transient receptor potential canonical channels 3,TRPC3)对U87MG胶质瘤细胞增殖的影响。方法:缺氧建立缺氧模型,以阻断剂抑制通道开放,以RNA干扰技术下调TRPC3的表达;CCK-8检测胶质瘤细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果:缺氧条件下TRPC1通道阻断剂及表达下调均可显著抑制U87MG细胞增殖,并引起G1期周期的阻滞。结论:缺氧微环境下TRPC3促进U87MG胶质瘤细胞的增殖。

Pokemon敲减对结肠癌Lovo细胞周期、迁移和侵袭能力的影响

目的观察Pokemon敲减对结肠癌Lovo细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。方法转染shRNA质粒构建Pokemon敲减的稳定细胞株Lovo-KD和阴性对照细胞株Lovo-NC,用荧光定量PCR检测Pokemon基因敲减效率,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果与Lovo-NC细胞比较,Lovo-KD细胞Pokemon mRNA水平下降65.0%(P<0.01),G1期细胞比例升高[(56.7±0.8)%vs(26.7±1.6)%,P<0.01],迁移细胞数[(8±4)vs(189±19)个/视野,P<0.01]和侵袭细胞数[(6±3)vs(183±13)个/视野,P<0.01]减少。结论 Pokemon基因敲减可将Lovo细胞阻滞于G1期,使细胞迁移和侵袭能力显著下降。

Pokemon基因敲减后Lovo细胞对DHC增殖抑制敏感性的变化

目的:观察Pokemon基因敲减后Lovo细胞对药物(dehydrocostus lactone,DHC)增殖抑制敏感性的变化。方法:构建Pokemon敲减的Lovo细胞稳定细胞株Lovo-KD,用荧光定量PCR检测Pokemon基因敲减效率,分别在Lovo-NC、Lovo-KD细胞中加入各浓度梯度的去氢木香内酯(dehydrocostus lactone,DHC),分别在24h、48h、72h用MTT法检测细胞增殖抑制效率。结果:与Lovo-NC组细胞相比,相同梯度DHC(10、15、20μg/ml)对Lovo-KD细胞24h、48h、72h的增殖抑制率均显著升高,如20μg/ml DHC作用48 h后Lovo-KD、Lovo-NC组细胞增殖抑制率分别为82.11±2.3%、28.93±2.4%,P<0.01。结论:Pokemon基因敲减可增加Lovo细胞对DHC药物增殖抑制敏感性。