IL-15对儿童MDS造血前体细胞bcl-2、bcl-xl mRNA表达的影响

目的探讨IL-15对骨髓增生异常综合征(MDS)造血细胞bcl-2、bcl-xlmRNA表达的影响,以探索IL-15抑制MDSCD34造血干／祖细胞凋亡的可能机制。方法采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统,分离纯化17例MDS患儿骨髓CD34细胞,采用RT-PCR检测bcl-2、bcl-xlmRNA表达水平,观察IL-15对它们的影响。结果IL-15可呈时间与剂量依赖性的增强体外培养的MDS造血前体细胞bcl-2、bcl-xl基因mRNA的表达。结论IL-15可能为抑制MDSCD34造血干／祖细胞凋亡的作用机制之一。

重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达

目的体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncatedprotamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白。方法设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5’和3’端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的基因片段亚克隆至pMD 18-Tsi mple载体中,经过酶切鉴定和测序验证。进一步将目的基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证。结果各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白。结论成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础。

IL-15对儿童MDS造血前体细胞凋亡的影响

为探讨IL 1 5对儿童骨髓增生异常综合征 (MDS)造血细胞凋亡的影响 ,为临床应用提供理论依据。采用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化 1 8例MDS患者骨髓CD34+细胞 ,采用碘化丙锭染色、流式细胞仪分析和细胞核形态检测两种方法同时检测体外培养的MDS造血前体细胞增殖、分化过程中的凋亡状况 ;观察IL 1 5对它们的影响 ,并进行了定量分析。结果表明 :发现IL 1 5可抑制体外培养的MDS造血前体细胞凋亡。在培养的第 8天 ,IL 1 51 0 0ng.ml- 1实验组细胞凋亡程度较没加IL 1

白细胞介素-15与肿瘤的免疫治疗

近年来 ,许多研究表明白细胞介素 1 5 (IL 1 5 )与肿瘤的发生、发展关系密切。一方面 ,它能扩增和激活自然杀伤细胞、CD8+ T细胞 ,增强机体的免疫力。另一方面 ,IL 1 5的不正确表达则对机体造成损害。故通过增加外源性IL 1 5来提高机体的免疫力和清除不正确表达的IL 1

新型酪氨酸激酶抑制剂PTK787/ZK222584的研究进展

PTK787/ZK222584是一种新型血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,通过抑制酪氨酸激酶的磷酸化,阻断信号传导,抑制肿瘤新生血管的形成从而抑制肿瘤的生长。临床前研究和临床试验研究显示该药对多种肿瘤有抗肿瘤活性,不良反应较轻。

Anti-LMP1scFv/tP融合蛋白基因递送载体在大肠杆菌中的表达与纯化

潜伏膜蛋白1(LMP1)是一种EB病毒编码的膜蛋白,组成型表达于各种肿瘤细胞表面。通过体外基因拼装技术,构建抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因(anti-LMP1scFv/tP)。在抗LMP1单链抗体基因的3'末端连接上编码鱼精蛋白截短体的基因序列,设计anti-LMP1scFv/tP融合蛋白基因。采用PCR为基础的基因拼接获得anti-LMP1scFv/tP。在大肠杆菌Rosseta中诱导表达anti-LMP1scFv/tP融合蛋白并利用其His标签在变性条件下通过Ni^(2+)亲合层析介质进行纯化,纯化产物通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性。间接免疫荧光染色检测anti-LMP1scFv/tP融合蛋白的抗原结合活性,DNA凝胶迁移阻滞实验检测anti-LMP1scFv/tP的DNA结合活性,结果显示anti-LMP1scFv/tP融合蛋白能够与LMP1阳性表达的CNE1-GL细胞结合,而不能与LMP1阴性表达的CNE1细胞结合;同时复性anti-LMP1scFv/tP融合蛋白也具有与DNA结合的活性。本研究为该单链抗体用于靶向输送外源核苷酸的研究奠定了基础。