多聚聚合酶-1在氢醌诱导的DNA损伤应答中的作用及其机制

目的探讨多聚聚合酶-1(PARP-1)在氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的DNA损伤应答中的作用及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以10μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组,分别在染毒0.5、1、2、3、4、5和6 h时收集细胞,以0 h为对照组,或用HQ处理PARP-1沉默细胞,运用western bloting技术检测TK6细胞中磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、聚腺苷二磷酸核糖(PAR)以及DNA损伤应答(DDR)相关蛋白PARP-1和抗凋亡转录因子(AATF)的表达情况。结果 HQ处理TK6细胞后,γ-H2AX的含量在3 h时达到高峰[(14.83±1.14)倍](P<0.05),此后逐渐下降;AATF的含量一直上升,6 h含量最高[(15.62±1.14)倍](P<0.05)。PARP-1的含量先下降后上升,3 h其含量最低[(0.66±0.04)倍](P<0.05)。PAR的含量在0.5 h达高峰[(1.78±0.13)倍](P<0.05),而后逐渐下降。PARP-1沉默细胞中,HQ处理使得PARP-1、PAR和AATF的含量分别降了77%(P<0.05)、64%(P<0.05)和68%(P<0.05),γ-H2AX的含量上升了1.65倍(P<0.05)。结论 PARP-1通过聚多聚腺苷二磷酸(ADP)核糖基化作用增强AATF稳定性参与由氢醌诱导的DNA损伤修复。

沉默PARP-1对miR-221表达的影响

目的探讨PARP-1沉默TK6细胞miR-221的表达。方法以空载体TK6细胞为对照组,以PARP-1沉默TK6细胞为处理组。免疫印迹法检测PARP-1蛋白表达量,反转录实时荧光定量-聚合酶链反应检测miR-221的表达改变。结果 PARP-1-shRNA组细胞PARP-1蛋白表达量与对照组细胞[(1.00±0.11)倍]相比,下降了75%(P<0.05),miR-221表达量与对照组细胞[(1.00±0.07)倍]相比,下降了26%(P<0.05)。结论 TK6细胞miR-221表达受PARP-1调节。