糖基化终末产物对肠道L细胞株胰高血糖素肽-1分泌水平及L细胞凋亡的影响

目的探讨糖尿病糖基化终末产物(AGEs)对肠道L细胞株GLUTag细胞凋亡及胰高血糖素肽-1(GLP-1)分泌水平的影响。方法 200μg/m L AGEs分别作用GLUTag细胞0、12、24、48 h,采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP-1分泌水平。实验分5组:空白对照组不加入干预因素,仅培养于DMEM低糖培养基中;BSA对照组培养于加入BSA的DMEM低糖培养基中;AGEs 100μg/m L组培养于100μg/m L AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 200μg/m L组培养于200μg/m L AGEs浓度的DMEM低糖培养基中;AGEs 300μg/m L组培养于300μg/m L AGEs浓度的DMEM低糖培养基中,分别作用细胞24h。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色检测细胞凋亡率。利用ELISA检测GLUTag细胞GLP-1分泌水平。结果各组细胞经药物干预24 h后,100、200、300μg/m L AGEs组的细胞凋亡率均显著高于空白对照组和BSA对照组(P=0.000);且300μg/m L AGEs组的细胞凋亡率最高(P<0.05),100、200、300μg/m L AGEs组的细胞分泌GLP-1浓度显著低于空白对照组和BSA对照组(P=0.000),且300μg/m L AGEs组最低(P<0.05)。200μg/m L AGEs作用12、24、48 h后的细胞凋亡率显著高于BSA对照组(P=0.000),且作用48 h组凋亡率最高(P=0.000);200μg/m L AGEs作用12、24、48 h后的细胞分泌GLP-1浓度均显著低于BSA对照组(P=0.000);且作用48 h最低(P<0.05)。结论肠道L细胞株GLUTag细胞的凋亡在相同作用时间下随着AGEs的浓度升高而增多,且在相同剂量下随着AGEs的作用时间延长而增多。AGEs可呈剂量、时间依赖性诱导肠道L细胞凋亡,并显著降低L细胞分泌GLP-1的能力。

住院糖尿病患者情况分析与研究

目的分析与研究糖尿病患者住院的现状及趋势,探讨糖尿病的防控措施。方法对2007年9月1日～2012年8月31日入住笔者医院的12176例糖尿病患者资料进行回顾性调查分析。结果糖尿病住院患者逐年增长,入院原因由高到低分别为血糖控制不良、微血管并发症、脑血管并发症、心血管并发症及各种感染;5年中因急性代谢紊乱入院者有下降趋势,因微血管并发症入院者有上升趋势。住院糖尿病患者随年龄增长而增加,男女性别比1∶0.79,男性于30岁后住院占比逐渐增加,女性于20～30岁及50岁后占比增加。住院患者中2型糖尿病占93.50%,1型糖尿病占2.70%、妊娠期糖尿病占3.74%、特殊类型糖尿病占0.62%。5年合计内分泌专科收治病人占所有糖尿病住院人数的40.37%。糖尿病并发微血管并发症33.79%,心脑血管并发症30.5%,急性代谢紊乱11.08%,伴随高血压57.4%,脂代谢紊乱31.6%,感染32.28%、肿瘤5.83%。人均次住院费用合并急慢性并发症及感染者较无并发症者费用增加。结论笔者医院糖尿病住院患者逐年增加,以中老年人为主,男女分布各有特点,非内分泌专科住院率较高,并发症及合并症是入院的主要原因及住院费用增加的主要因素。根据不同年龄、性别制定有针对性的防治方案,及早发现、及早治疗,加强综合治疗及非专科医师糖尿病知识的培训是糖尿病防治的关键。

罗格列酮钠与美卡素对糖尿病早期肾病的疗效观察

目的观察太罗(罗格列酮钠)对糖尿病早期肾病尿微量清蛋白排泄的影响。方法将80例糖尿病肾病Ⅲ期患者随机分两组。美卡素治疗组40例在给予糖尿病常规治疗基础上加用80mg/日口服,太罗组40例给予在常规治疗基础上加用太罗4mg/日口服,疗程3个月。治疗前后进行相关指标检查。结果两组均可降低糖尿病肾病Ⅲ期患者尿微量清蛋白排泄,两组治疗后尿微量清蛋白排泄率差异无统计学意义。结论应用太罗治疗能有效减低糖尿病早期肾病尿蛋白排泄。

缺铁性贫血和地中海贫血对糖化血红蛋白测定的影响

目的探讨缺铁性贫血和地中海贫血对糖化血红蛋白测定的影响。方法对2012~2014年我院缺铁性贫血（80例）、地中海贫血（78例）和健康体检者（对照组80例）进行铁代谢、血液分析、空腹血糖及糖化血红蛋白和肌酐等测定,所有贫血患者进行地中海基因监测。结果在铁代谢4项的比较中,缺铁性贫血组的血清铁、铁蛋白、转铁蛋白饱和度低于地中海贫血组及对照组（P〈0.05）,缺铁性贫血组的总铁结合力高于地中海贫血组及对照组（P〈0.05）。血红蛋白的比较：缺铁性贫血组血红蛋白低于对照组（P〈0.05）;地中海贫血组血红蛋白低于对照组;糖化血红蛋白的比较：缺铁性贫血组糖化血红蛋白高于地中海贫血组及对照组（P〈0.05）,地中海贫血组糖化血红蛋白低于对照组（P〈0.05）。结论对于缺铁性贫血和地中海贫血患者,糖化血红蛋白未必能正确反映其血糖控制情况,缺铁性贫血患者可高估糖化血红蛋白数值,地中海贫血可低估糖化血红蛋白数值。

艾塞那肽对间歇性高糖下INS-1细胞周期及细胞周期蛋白影响

目的探讨艾塞那肽(Exenatide)对间歇性高糖影响胰岛素瘤细胞INS-1细胞周期进程的相关蛋白的作用,了解其干预细胞增殖变化的有关分子机制。方法实验分为5组:正常糖组,即培养于葡萄糖浓度5.5 mmol/L的RPMI-1640(1640培养液)完全培养液;恒定性高糖组,培养于葡萄糖浓度30 mmol/L的RPMI-1640完全培养液;间歇性高糖组,即每24 h轮换培养于葡萄糖浓度5.5mmol/L或30.0mmol/L的RPMI-1640完全培养液;恒定性高糖+艾塞那肽组,培养液含葡糖糖浓度30.0 mmol/L并加入终浓度为100.0 nmol/L艾塞那肽;间歇性高糖+艾塞那肽组,间歇性高糖的基础上加入终浓度为100.0 nmol/L艾塞那肽。各组细胞在37℃、体积分数5%CO2条件下培养7 d。细胞增殖活性8试剂盒检测细胞增殖活性,碘化丙啶染色及流式细胞仪检测细胞周期。Western blot检测细胞周期素D1(cyclin D1)、p21蛋白表达情况。结果恒定性高糖+艾塞那肽组及间歇性高糖+艾塞那肽组细胞增殖活性与正常糖组相比无统计学意义,但高于恒定性高糖组及间歇性高糖组[5组间差异有统计学意义(F=3 026,P=0.000)]。恒定性高糖+艾塞那肽组(49.12%±3.72%)和间歇性高糖+艾塞那肽组(49.73%±4.04%)的G0/G1细胞周期分布与正常糖组(48.75%±3.11%)相比,差异无统计学意义,但低于恒定性高糖组(56.54%±3.50%)及间歇性高糖组(65.54%±3.63%)(F=20.054,P=0.000)。恒定性高糖+艾塞那肽组(0.41±0.02)及间歇性高糖+艾塞那肽组(0.43±0.07)cyclin D1表达水平与正常糖组(0.46±0.03)无差异,但明显高于恒定性高糖组(0.31±0.02)及间歇性高糖组(0.18±0.03)(F=29.284,P=0.000)。恒定性高糖+艾塞那肽组(0.21±0.05)及间歇性高糖+艾塞那肽组(0.22±0.03)p21表达水平与正常糖组(0.19±0.05)无差异,但明显低于恒定性高糖组(0.40±0.03)及间歇性高糖组(0.51±0.04)(F=40.296,P=0.000)。结论艾塞那肽使在间歇性或恒定性高糖条件下,INS-1细胞周期进程正性调控蛋白cyclin D1的表达水平升高,并减少细胞周期抑制性的蛋白p21的表达水平,这一变化可能有利于减轻间歇性及恒定性高糖对INS-1细胞周期的阻滞效应,从而促进了细胞周期进程,增强了INS-1细胞的增殖活性。

晚期糖基化终末产物对肠道L细胞凋亡及增殖活性的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对肠道L细胞株GLUTag细胞凋亡及细胞增殖活性的影响。方法肠道L细胞株GLUTag细胞由加拿大多伦多大学Druker实验室惠赠。将GLUTag细胞株分5组:空白对照组,牛血清白蛋白(BSA)对照组,AGEs 100μg/m L组,AGEs 200μg/m L组,AGEs 300μg/m L组。培养方法:空白对照组,将GLUTag细胞株培养于低糖DMEM中;BSA对照组,将GLUTag细胞株细胞培养于加入BSA的低糖DMEM中;AGEs 100μg/m L组,将GLUTag细胞株培养于终质量浓度100μg/m L AGEs的低糖DMEM中;AGEs 200μg/m L组,将GLUTag细胞株培养于终质量浓度200μg/m L AGEs的低糖DMEM中;AGEs 300μg/m L组,将GLUTag细胞株培养于终质量浓度300μg/m L AGEs的低糖DMEM中;每组细胞均培养24 h。将培养在终质量浓度200μg/m L AGEs中GLUTag细胞株分别培养0、12、24、48 h(即4组)。各组细胞干预结束后采用双染细胞凋亡检测方法检测细胞凋亡率;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态;细胞计数试剂盒检测细胞增殖活性。结果各组细胞经药物干预24 h后,AGEs 100μg/m L组、AGEs 200μg/m L组、AGEs 300μg/m L组凋亡细胞百分率明显升高,均显著高于空白对照组和BSA对照组,且AGEs 300μg/m L组凋亡细胞百分率最高(P=0.000)。AGEs 200μg/m L作用12、24、48 h后凋亡细胞百分率显著高于阴性对照组(作用0 h),且作用48 h凋亡率最高(P=0.000)。100、200、300μg/m L AGEs作用GLUTag细胞24 h后,细胞活性光密度(OD)值显著低于空白对照组和BSA对照组,且AGEs 300μg/m L组OD值最低(P<0.05)。AGEs 200μg/m L作用12、24、48 h后细胞OD值显著低于阴性对照组(作用0 h),其中48 h组OD值最低(P<0.05)。结论 AGEs对肠道L细胞株GLUTag细胞的凋亡及增殖活性均产生影响,其细胞凋亡率在相同作用时间下随着AGEs的浓度增高而增多,且在相同剂量下随着AGEs的作用时间延长而增多。AGEs可诱导肠道L细胞凋亡,抑制细胞增殖活性,从而损伤肠道L细胞。

应用经食管实时三维超声评价缺血性二尖瓣反流及瓣叶形态功能变化的研究

目的应用经食管实时三维超声（RT-3D-TEE）和二尖瓣立体结构定量（MVQ）分析软件,对缺血性二尖瓣反流（IMR）的二尖瓣瓣环及瓣叶功能进行评价,筛选出对IMR机制有意义的参数。方法 25例IMR组患者,其中男性14例,女性11例;年龄41~72岁,平均年龄41.7岁。20例正常对照组,其中男性11例,女性9例;年龄37~69岁,平均年龄38.6岁。行RT-3D-TEE技术对2组患者进行检查,应用MVQ分析软件测量并分析2组二尖瓣瓣环及瓣叶几何形态学参数变化特点。结果 IMR组反流容积（46±11）m L,有限反流口面积（0.31±0.12）cm2,说明IMR组存在中度反流。与正常对照组相比,IMR组反映二尖瓣瓣环解剖结构参数如瓣环前外侧交界到后内侧交界的距离（DAIPm）、前叶瓣环中点到后叶瓣环中点的距离（DAP）、瓣环三维周长（C3DE）、绕环最小表面面积（A3Dmin）、环的椭圆度（E2D）及二尖瓣帆状区容积（Vtent）均有所增加（P﹤0.05）;瓣环最高点所在平面与最低点所在平面的高（H）、环高度与联合直径的比率（H/DAIPm）、前后瓣叶对合的参数投影平面中的结合长度（L2DAIPm）及前后叶关闭时对合线的长度（LC3DLf）均有所减低（P﹤0.05）。与正常对照组相比,IMR组前小叶角度（θant）、后小叶角度（θpost）及小叶非平面角度（θnpa）未见明显变化。结论通过RT-3D-TEE能够为缺血性二尖瓣反流患者提供局部二尖瓣瓣环功能或形态异常的量化指标,为临床医生选择个性化治疗方案和疗效评价提供了依据。

雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾小球足细胞病变的保护作用

目的探讨雷公藤多苷(TWP)对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞病变及肾皮质nephrin蛋白表达的影响,为糖尿病的治疗提供实验依据。方法建立高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导DN大鼠模型,按随机数字表法分为DN组13只,小剂量TWP组(每天8 mg/kg)13只和大剂量TWP组(每天16 mg/kg)14只,并以正常大鼠为对照组(n=15)。干预12周后检测大鼠24 h尿蛋白量、血肌酐值(SCr)、尿素氮(BUN)、血糖(Glu)、肾质量/体质量的变化,并以光学显微镜及电子显微镜观察肾脏组织病理改变;免疫荧光法检测肾皮质nephrin蛋白表达。用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析。结果与对照组大鼠[(0.06±0.02)mg]比较,DN组大鼠24 h尿蛋白[(1.87±0.12)mg]明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),TWP干预可显著减少糖尿病大鼠尿蛋白排泄,小剂量和大剂量TWP组尿蛋白分别为(0.98±0.21)、(0.33±0.11)mg,与DN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),此效应与TWP干预剂量相关,大剂量TWP组尿蛋白较小剂量TWP组下降更明显,差异统计学意义(P<0.05)。病理结果显示,DN组表现为肾小球体积增大,基底膜增厚,系膜基质显著增多,足细胞足突增宽、融合、细胞减少;TWP组大鼠肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻。免疫组化结果显示,DN组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达[每个肾小球平均(2.35±1.75)个]较对照组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达[每个肾小球平均(18.24±2.89)个]明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),而TWP组大鼠肾脏皮质nephrin蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.01),且小剂量TWP组[每个肾小球平均(11.34±1.56)个]与大剂量TWP组[每个肾小球平均(15.27±2.03)个]的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TWP干预可缓解DN大鼠足细胞病变,肾皮质nephrin蛋白表达上调可能在该保护机制中发挥作用。

脂联素基因5′端调控区-11391G/A核苷酸多态性与2型糖尿病发病的相关性

目的探讨中国人脂朕素基因SNP-11391G/A和-11371C/G位点变异与2型糖尿病发病的关系。方法运用PCR-RFLP技术在258例(86例非糖尿病者和172例2型糖尿病患者)大连地区汉族人检测APN基因SNP-11377C/G和-11391G/A变异情况,分析其与2型糖尿病发病的相关性。结果-11377C/G多态性与糖尿病发病无关,-11391G/A多态性与2型糖尿病发病相关(χ2=7.662,P<0.005)。结论APN基因-11391A基因变异可能与变异携带者胰岛细胞代偿功能相关。

罗格列酮治疗深圳地区汉族人群不同脂联素基因型2型糖尿病患者的临床观察

目的:观察罗格列酮治疗不同脂联素(APN)基因型的2型糖尿病患者的临床效果。方法:运用PCR-RFLP技术检测407例(136例非糖尿病者和271例2型糖尿病患者)深圳地区汉族APN基因SNP-11377C/G和-11391G/A变异情况,对其中150例2型糖尿病患者应用罗格列酮治疗12周。分析各位点与糖尿病的相关性,及用药前后血糖、血脂、胰岛功能及APN的变化情况。结果:深圳地区汉族人群APN基因SNP-11377C/G多态与糖尿病发病无显著相关,但CG+GG基因型APN浓度显著下降,HOMA-IR加重(P<0.05)。深圳地区汉族人群APN基因SNP-11391G/A多态与糖尿病发病可能相关,GA+AA基因型APN浓度显著下降,HOMA-IR加重(P<0.05)。结论:SNP-11377位点C/G变异可能影响罗格列酮的降糖效果,对药物敏感性CC型优于CG+GG型。

肿瘤坏死因子α诱导位点特异性DNA去甲基化促进基质金属蛋白酶9的表达

目的研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导位点特异性DNA去甲基化促进人表皮角质细胞基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达。方法用10ng／ml的TNF-α或2．5μmol／L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷（DAC）联合300nmol／L的曲古菌素A（TSA）处理人表皮角质细胞株HaCaT细胞，采用实时荧光定量PCR（Real-time RT-PCR）检测各组细胞MMP9mRNA水平，采用蛋白质印迹（WesternBlot）及酶联免疫吸附法（ELISA）检测MMP9蛋白的表达水平。应用亚硫酸氢钠修饰后测序法（BSP）及甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法（Ms-HRM）检测TNF-α干预细胞后MMP9启动子区DNA甲基化改变差异最大的CpG位点。构建不同位点甲基化的MMP9启动子一荧光素酶报告基因重组质粒，检测特异性位点的DNA甲基化状态改变对MMP9启动子转录活性的影响。结果各培养时间点。TNF-α干预组均较相应PBS对照组HaCaT细胞拘MMP9表达量升高，且差异均有统计学意义（P〈0．05）；经实时RT—PCR、蛋白质印迹和ELISA三种方法分别检测到的MMP9mRNA和蛋白表达量随干预时间的变化趋势一致，均为先升高后下降。TNF-α干预后MMP9启动子区的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变，其中-36bp位点改变的差异有究计学意义（P〈0．05）。-36bp位点去甲基化后，MMP9转录活性明显提高。TNF-α干预后MMP9启动子爰的10个CpG位点均发生不同程度的DNA去甲基化改变，其中-36bp位点改变的差异有统计学意义：P〈0．05）。-36bp位点去甲基化后，MMP9转录活性明显提高。结论TNF-α通过诱导HaCa]r细胞MMP9基因启动子-36bp位点DNA去甲基化上调MMP9表达。

糖尿病胃轻瘫的诊治进展

糖尿病性胃轻瘫是指病史较长的糖尿病患者伴有的胃动力障碍、胃排空延迟、无机械性肠梗阻的一组临床综合征。通常表现为恶心、早饱、餐后腹胀、纳减、呕吐、腹痛和体重下降等症状。大约有50%的1型和2型糖尿病的患者伴有胃轻瘫。早于1937年 Ferroir

糖尿病患者颈动脉内中膜厚度、脉搏波传导速度测定的临床意义

目的探讨糖尿病患者的颈动脉内中膜厚度（IMT）、脉搏波传导速度（PwV）的关系。方法100例2型糖尿病患者随机分为：氢氯噻嗪组35例，缬沙坦组35例，缬沙坦联合氢氯噻嗪治疗组（联合组）30例，分别治疗16周，观察治疗前后各组收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、24h尿白蛋白、血尿素氮（BUN）、颈动脉内中膜厚度（IMT）、脉搏波传导速度（PwV）、空腹血糖（FPG）。结果三组治疗前后SBP、DBP、24h尿白蛋白较治疗前比较有显著性差异（t=2．7875，2．755，2．733，2．645，均P〈0．05）；与IMT显著相关的因素依次有SBP（r=0．669，P=0．013）、脉压（r=0．581，P=0．015）、FPG（r=0．337，P=0．018）。与PWV显著相关的因素依次有SBP（r=0．759，P=0．001）、脉压（r=0．707，P=0．002）、FPG（r=0．679，P=0．016）。结论PWV可作为评价2型糖尿病患者大动脉顺应性的无创指标。PwV的测量，对其血管并发症具有重要的临床价值。

呼出气冷凝液中氮氧化物在评价2型糖尿病肺损害中的作用

目的观察2型糖尿病患者呼出气冷凝液（EBC）中氮氧化物的改变，为诊断2型糖尿病肺损害提供新方法。方法试验共纳入36例2型糖尿病患者和31名健康者，用Rtube收集器收集EBC，用分光光度法检测EBC中氮氧化物（NO2^-、NO3^-、总NO2^-／NO3^-），同时记录肺功能。结果2型糖尿病患者EBC中NO2^-、总NO2^-／NO3^-浓度水平高于健康对照组（P〈0．05或P〈0．01）；2型糖尿病肺功能第1秒用力呼气量（FEV，）占预计值％、肺一氧化碳弥散量（DLCO）、DLCO占预计值％比健康对照组降低（P值均〈0．05）；2型糖尿病组EBC中NO2^-的浓度及总NO2^-／NO3^-与FEV1占预计值％、DLCO、DLCO占预计值％有相关性（P〈0．05或P〈0．01）。结论EBC中氮氧化物在2型糖尿病肺损害的发病中起重要作用。

2型糖尿病患者血清联朕素浓度与尿微量白蛋白相关性的研究

选取门诊及住院2型糖尿病患者190人,收集所有受试对象24小时尿液用反射比浊法测定24小时尿白蛋白定量分组,选取健康志愿者50人做对照,测定脂联素浓度及血糖、血脂、胰岛素,分析各组各项指标间的相关性。结果:脂联素水平在早期糖尿病及伴有微量蛋白尿组较正常人群组明显下降.在大量蛋白尿组明显上升(P<0.05)。糖尿病组间随着尿蛋白排泄的增多,脂联素水平明显升高,受UAER影响最大(B=0.033,P<0.01)。结论:低脂联素血症可能是导致糖尿病的发生原因之一,UAER为影响2型糖尿病患者脂联素水平的独立危险因素。